[發明專利]一種植物根表微生物組的獲取方法

在審

• 申請號: 202011454306.6
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112501023A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 李孝剛;李鳳巧;靳志麗
• 申請（專利權）人: 湖南省煙草公司永州市公司;南京林業大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N13/00;C12Q1/24
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 董大媛

本發明提供了一種植物根表微生物組的獲取方法，屬于微生物技術領域，所述獲取方法包括以下步驟：將所述植物的根系浸沒于表面活性劑中，進行超聲波處理，收集含有植物根表微生物組的懸液。本發明采用表面活性劑弱化植物根表胞外膜蛋白或多糖層的粘附，從而降低微生物在根表的吸附能力。進一步通過超聲波的震蕩作用，可以使微生物從根表脫落，從而獲得根表微生物懸液。本發明具有操作簡便、針對性強、收集效率高等優點，有助于廣泛應用于絕大多數種類土壤和(或)植物的根表活體微生物組的獲取。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種植物根表微生物組的獲取方法。

背景技術

植物根系提供了一個復雜的微生態環境，是大量微生物的互動棲息地。在植物根系直接影響的幾毫米范圍內生長繁殖的微生物被稱為植物根系微生物，這些微生物顯著影響著植物的生長發育和營養吸收等過程。根據不同的空間位置，植物根系又被分為根內、根表及根際三個生態位，它們之間的微生物群落結構具有顯著差異。因此，充分利用和發揮根系不同生態位的微生物資源，開發生物肥料和生物防控劑，從而降低傳統農業對化肥和農藥的過度依賴，對于提高作物產量、保障農業的可持續發展等具有重要意義。

作為根內環境和土壤環境的中間屏障，根表在根內微生物定殖過程中起著重要的篩選作用。雖然國內外對植物根系微生物的研究取得了一定進展，但目前主要集中在根際和根內微生物組方面的研究，這是由于根表微生物含量通常較少且獲取難度大。特別是，根表微生物通常表現為具有生物膜、細胞積聚性高，與植物根部表面結合密切，不易脫落等特點。因此，當前有關根表微生物提取方法的欠缺及有效性低是限制根表微生物研究的重要因素。

發明內容

本發明的目的在于提供一種植物根表微生物組的獲取方法，本發明的獲取方法具有針對性強、收集效率高等優點。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種植物根表微生物組的獲取方法，包括以下步驟：將所述植物的根系浸沒于表面活性劑中，進行超聲波處理，收集含有植物根表微生物組的懸液。

優選的，所述表面活性劑包括Tween 80。

優選的，所述Tween 80的濃度為0.3～0.8mmol/L。

優選的，所述超聲波處理的溫度為1～4℃；所述超聲波處理的功率為50～120W；所述超聲波處理的頻率為40～60kHz。

優選的，所述超聲波處理的次數為2～4次，每次超聲波處理的時間獨立為0.01～3min。

優選的，在所述收集含有植物根表微生物組的懸液后，還包括對所述懸液進行離心，收集沉淀，所述沉淀中含有植物根表微生物組。

優選的，所述離心的離心力為3000～5000g；所述離心的時間為5～10min。

優選的，在將所述植物的根系浸沒于表面活性劑中前，還包括沖洗去除所述根系表面的土壤；所述沖洗采用的試劑包括磷酸鹽緩沖液；所述磷酸鹽緩沖液的pH值和所述根系的土壤的pH值一致。

優選的，所述沖洗的次數為2～3次。

優選的，所述植物包括煙草。

本發明提供了一種植物根表微生物組的獲取方法，包括以下步驟：將所述植物的根系浸沒于表面活性劑中，進行超聲波處理，收集含有植物根表微生物組的懸液。本發明采用表面活性劑可有效弱化植物根表胞外膜蛋白或多糖層的粘附，從而降低微生物在根表的吸附能力。而且超聲波的震蕩作用，可以使微生物從根表脫落，從而獲得含有根表微生物的懸液。本發明的方法獲取的植物根表微生物組可直接用于微生物組DNA提取，也可將獲得的根表微生物懸液直接平板涂布獲得類群繁多的活體菌株，便于后續相關菌株的針對性研究。本發明具有操作簡便、根表微生物特異性強、收集效率高等優點，有助于廣泛應用于絕大多數種類土壤和(或)植物的根表活體微生物組的獲取。