[發明專利]一種蟬花子實體多糖及其制備和用途

在審

• 申請號: 202011453960.5
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112552424A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 賀亮;程俊文;黃旭波;王衍彬;魏海龍;楊柳;李海波;胡傳久
• 申請（專利權）人: 浙江省林業科學研究院
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;A61K31/716;A61P37/02
• 代理公司: 杭州星河慧專利代理事務所(普通合伙) 33410
• 代理人: 劉曉丹

1.一種蟬花子實體多糖，其特征在于，包含重量百分含量99％以上的多糖；所述多糖的組成為葡萄糖，多糖的結構以1→4連接的α-葡萄糖為主鏈，且每7個α-葡萄糖組成一個重復單元，每個重復單元中有一個α-葡萄糖的C6位上被端基α-葡萄糖取代。

2.根據權利要求1所述的蟬花子實體多糖，其特征在于，所述蟬花子實體多糖的重均分子量為160KDa-180KDa。

3.根據權利要求1或2所述的蟬花子實體多糖，其特征在于，所述α-葡萄糖為α-D-葡萄糖。

4.根據權利要求1-3任一項所述的蟬花子實體多糖的制備方法，其特征在于，由蟬花子實體經提取、自由基降解和分離得到。

5.根據權利要求4所述的蟬花子實體多糖的制備方法，其特征在于，包括步驟：

(1)提取：蟬花子實體經水提取，得到蟬花子實體水提液；

(2)自由基降解：在蟬花子實體水提液中加入維生素C和H₂O₂進行自由基降解反應，降解后經離心除去沉淀物，保留上清液即得到降解產物；

(3)去蛋白：將降解產物用蛋白酶酶解，滅酶并離心除去變性蛋白和酶，離心所得上清液再用有機溶劑離心除去下層有機相和中間的蛋白層，重復用有機溶劑離心的步驟直至無白色沉淀產生，得到提取液；

(4)透析：將提取液用孔徑為6000Da-8000Da的透析袋在水中透析，收集透析后的提取液，真空冷凍干燥得蟬花子實體粗多糖；

(5)純化：將蟬花子實體粗多糖溶于水得到蟬花子實體粗多糖水溶液，經二乙氨基乙基瓊脂糖凝膠離子交換層析柱層析，收集的洗脫液用苯酚-硫酸法檢測多糖，收集富集多糖的洗脫液經凝膠過濾層析，凝膠過濾層析所收集的洗脫液用苯酚-硫酸法檢測多糖，收集含多糖的洗脫液，經濃縮、透析和凍干得到白色疏松絮狀的蟬花子實體多糖。

6.根據權利要求5所述的蟬花子實體多糖的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述蟬花子實體水提液的制備包括：稱取蟬花子實體原料，粉碎，按料液重量比為1:20至1:40加入水，溫度控制在85℃-95℃，提取時間1.5h-3h，得到蟬花子實體水提液。

7.根據權利要求5所述的蟬花子實體多糖的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述自由基降解反應的溫度控制在45℃-55℃，攪拌反應1h-2h。

8.根據權利要求5所述的蟬花子實體多糖的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述維生素C和H₂O₂以水溶液的形式加入；所述維生素C采用濃度為10mmol/L-20mmol/L的維生素C水溶液；所述H₂O₂采用濃度為10mmol/L-25mmol/L的H₂O₂水溶液。

9.根據權利要求1-3任一項所述的蟬花子實體多糖在促進小鼠巨噬細胞株RAW264.7增殖、促進小鼠巨噬細胞株RAW264.7中細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的釋放中的應用。

10.根據權利要求1-3任一項所述的蟬花子實體多糖在作為免疫調節劑或者制備免疫調節劑中的應用。