[發明專利]一種利用外周血細胞制備黿染色體標本的方法有效
| 申請號： | 202011453959.2 | 申請日： | 2020-12-10 |
| 公開（公告）號： | CN112577803B | 公開（公告）日： | 2021-11-09 |
| 發明（設計）人： | 陳辰;洪孝友;朱新平;劉曉莉;曹建萌;仇全波 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院珠江水產研究所;佛山市高明區萬綠源生態種養殖有限公司 |
| 主分類號： | G01N1/30 | 分類號： | G01N1/30;G01N1/28;A61B5/153 |
| 代理公司： | 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 王穎 |
| 地址： | 510380 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 血細胞 制備 染色體 標本 方法 | ||
1.一種黿染色體標本的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)外周血取樣：使用負壓采血管和滅菌針頭，從活體黿的頸部血竇中采集外周血1mL；血液采集后，置于4℃條件下暫存；
2)外周血細胞培養：在無菌條件下進行細胞培養操作；在CO2濃度為5％、28℃條件下培養72h；
3)秋水仙素處理：培養完成的血細胞，加入終濃度為100～150ng/mL的秋水仙素處理3～4小時；
4)染色體制片：秋水仙素處理后，低滲50min；低滲后，用1500r/min的轉速收集細胞，使用卡諾固定液固定1～2次，后采用冷玻片干燥法進行制片；使用吉姆薩染液染色20min；
所述負壓采血管中含有肝素鈉；
步驟2)中使用改良的市售Eagle基礎培養基，培養基改良配方為在基礎培養基上加入：20mM 4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1mM谷氨酸鹽，2nM亞硒酸鈉，1mM非必須氨基酸，1mM丙酮酸鈉，1mM青霉素和鏈霉素雙抗，55μMβ-巰基乙醇，15％胎牛血清，5ng/mL重組人堿性成纖維細胞生長因子；每3mL培養基加200μL全血，另外加入750μg植物血球凝集素。
2.根據權利要求1所述的黿染色體標本的制備方法，其特征在于，步驟4)中所使用的卡諾固定液中甲醇與冰醋酸的體積比為3：1。
3.根據權利要求1所述的黿染色體標本的制備方法，其特征在于，步驟4)中所使用的吉姆薩染液中吉姆薩原液和磷酸緩沖液的體積比為1：6，現配現用。
4.一種根據權利要求1-3任一項所述的黿染色體標本的制備方法制備得到的黿染色體標本。
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