[發明專利]IRES序列、IRES序列的應用和多順反子表達載體

在審

• 申請號: 202011453220.1
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112592923A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 戴俊彪;盧俊南;楊煒釤;溫欒;林鑫
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/65;C12Q1/02
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 李紅艷

本申請屬于基因工程技術領域，具體涉及一種IRES序列、IRES序列的應用和多順反子表達載體。所述IRES序列是基于SARS?Cov?2中的ORF8基因片段得到的。該IRES序列可以直接從SARS?Cov?2中分離得到，也可以人工合成。該IRES序列具備對真核生物的起始翻譯能力，可以應用于目標基因的表達過程，也可以應用于抗SARS?Cov?2藥物的篩選。

技術領域

本申請屬于基因工程技術領域，具體涉及一種內部核糖體進入位點 (InternalRibosome Entry Sites，IRES)序列、IRES序列的應用和多順反子表達載體。

背景技術

真核生物的翻譯(Translation)過程是基因表達的重要階段，是指將從脫氧核糖核酸(DNA)轉錄得到的真核生物的信使核糖核酸(mRNA)上的遺傳信息合成蛋白質的過程。真核生物的翻譯過程中，需要依賴mRNA的5’端帽子結構與核糖體結合，起始翻譯。但對于缺乏帽子構的RNA病毒，可以基于RNA 病毒的5’端非翻譯區(untranslated region,UTR)翻譯調控的順式作用元件IRES序列，招募核糖體進入病毒的mRNA起始翻譯。

IRES序列是一種具有非帽子結構依賴性的起始翻譯能力的核苷酸序列，能夠在反式作用因子的輔助下，招募核糖體進入病毒mRNA的翻譯起始位點。并且有研究表明，將IRES序列與外源cDNA融合，IRES能獨立的起始翻譯。因此對IRES序列的研究對基因表達有著重要的意義。

發明內容

本申請提供一種IRES序列、IRES序列的應用和多順反子表達載體，該IRES 序列具備對真核生物的起始翻譯能力，能夠應用于目標基因的表達過程。

第一方面，本申請提供一種IRES序列，所述IRES序列是基于SARS-Cov-2 中的ORF8基因片段得到，所述ORF8基因片段如SEQ ID NO.1所示。

本申請提供的IRES序列具備對真核生物的起始翻譯能力，能夠應用于目標基因的表達過程。

可選的，所述IRES序列如SEQ ID NO.1所示。

可選的，所述IRES序列是所述ORF8基因片段經過延長、裁切、重組和/ 或突變得到的序列。

可選的，所述IRES序列包括：所述ORF8基因片段，以及，所述ORF8 基因片段在所述SARS-Cov-2中的上游區段和/或下游區段。

可選的，所述IRES序列包括所述ORF8基因片段、120bp的所述上游區段和14bp的所述下游區段，所述IRES序列如SEQ ID NO.2所示。

可選的，所述IRES序列從所述SARS-Cov-2中分離得到。

第二方面，本申請提供一種如第一方面或第一方面的任一可選方式所述的 IRES序列在目的基因表達上的應用。

第三方面，本申請提供一種如第一方面或第一方面的任一可選方式所述的 IRES序列在抗SARS-Cov-2藥物篩選中的應用。

第四方面，本申請提供一種多順反子表達載體，包括如第一方面或第一方面的任一可選方式所述的IRES序列，所述IRES序列位于所述多順反子表達載體中目的基因的起始密碼子上游。

本申請提供的多順反子表達載體能夠同步表達多順反子表達載體中包含的目的基因。

可選的，所述多順反子表達載體為雙熒光蛋白表達載體，所述雙熒光蛋白表達載體包括所述IRES序列、GFP和mCherry，所述IRES序列位于所述GFP 的終止密碼子和所述mCherry的起始密碼子之間。

附圖說明

圖1是本申請實施例提供的一種有IRES序列的雙熒光蛋白表達載體的圖譜；