[發明專利]快速早期鑒定雜草稻的PCR引物及其應用

在審

• 申請號: 202011451137.0
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112410458A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 夏啟玉;張雨良;張麗麗;賀萍萍;趙輝;郭安平
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超;趙龍驤

1.一種快速早期鑒定雜草稻的RCR引物，其特征在于：所述引物為P-Bh4引物：

正向引物P-Bh4-F為：5’-TGATATGCTTCCTGCTGTGCAC-3’，

反向引物P-Bh4-R為：5’-GACGGCCACGTTGAGCATCGAT-3’。

2.一種權利要求1所述RCR引物在水稻苗期快速鑒定雜草稻中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述應用的方法：

1)DNA提取，提取待檢測的水稻基因組DNA；

2)PCR擴增：以步驟1)提取的DNA為模板，采用權利要求1所述的RCR引物進行PCR擴增；

3)PCR產物電泳觀察鑒定：

若泳道上出現一條356bp的條帶時，則判定待檢測水稻為雜草稻。

4.一種快速早期鑒定雜草稻和栽培稻的雙重PCR引物組合，其特征在于：所述組合引物由P-Bh4引物和P-Rc引物的兩對引物組成，其中，P-Bh4引物為：

正向引物P-Bh4-F為：5’-TGATATGCTTCCTGCTGTGCAC-3’，

反向引物P-Bh4-R為：5’-GACGGCCACGTTGAGCATCGAT-3’。

P-Rc引物為：

正向引物P-Rc-F為：5’-CATTCTCCAGATGGACTACTCC-3’，

反向引物P-Rc-R為：5’-GATGGCACCGACTTTTCGCGT-3’。

5.一種快速早期鑒定雜草稻和栽培稻的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求4所述的雙重PCR引物組合。

6.一種權利要求4所述雙重PCR引物組合或權利要求5所述的試劑盒在快速鑒定雜草稻和栽培稻中的應用。

7.一種在水稻苗期快速鑒定雜草稻和栽培稻的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)DNA提取，提取待檢測的水稻基因組DNA；

2)PCR擴增：以步驟1)提取的DNA為模板，采用權利要求4所述的雙重PCR引物組合進行雙重PCR擴增；

3)PCR產物電泳觀察鑒定：

若泳道上有兩條或一條目標條帶時，則判定該待檢測水稻均為雜草稻，

若無特異性條帶的為栽培稻。

8.根據權利要求7所述在水稻苗期快速鑒定雜草稻和栽培稻的方法，其特征在于：所述步驟3)中，

若泳道上同時出現一條356bp和一條191bp的條帶時，則判定待檢測水稻為黑色穎殼紅色果皮的雜草稻；

若泳道上出現一條356bp的條帶時，則判定待檢測水稻為黑色穎殼白色果皮的雜草稻；

若泳道上出現一條191bp的條帶時，則判定待檢測水稻為黃色穎殼紅色果皮的雜草稻；

若泳道上無特異性條帶時，則判定待檢測水稻為栽培稻。

9.根據權利要求7所述在水稻苗期快速鑒定雜草稻和栽培稻的方法，其特征在于：所述步驟2)中，雙重PCR反應體系為：

滅菌雙蒸水 9.5μL

2×PCR Mix 12.5μL

引物P-Bh4 各0.4μL

引物P-Rc 各0.6μL

模板DNA 1μL

雙重PCR擴增條件為：95℃預變性5min；95℃30s，64℃30s，72℃30s，共30個循環；72℃延伸7min。