[發明專利]抗β-catenin蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011449336.8
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112457400B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 彭永輝;楊清海;王小亞;高慧然;李恢波;黃信超;鄧曉;李玲玲
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及生物檢測領域，提供了一種抗β?catenin蛋白單克隆抗體,其重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。發明人還提供了抗β?catenin蛋白單克隆抗體的制備方法，選取人β?catenin氨基酸第699?712位蛋白并與KLH偶聯，作為免疫原。發明人還提供了一株分泌抗β?catenin蛋白的雜交瘤細胞系，所述細胞系為小鼠雜交瘤細胞系3B1D11A8，保藏號為：CGMCC NO.19685。抗β?catenin蛋白單克隆抗體,具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達β?catenin蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及抗β-catenin蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用。

背景技術

β-連環蛋白(β-catenin)最早于1980年由德國細胞生物學家Walt Birchmeier發現。在腫瘤細胞的侵襲與轉移過程中，其中一個重要的環節就是重組細胞骨架、拆解及組裝細胞間的粘附，adhesion/catenin復合體對調節細胞間粘附起主要作用，而β-catenin是該復合體的重要組成部分，對連接細胞外粘附因子、細胞骨架以及維持上皮細胞正常形態起重要作用。并且腫瘤遷移相關的蛋白如：MMP、CD44和纖連蛋白也受β-catenin/Wnt信號通路的調控。

β-catenin其編碼基因CTNNBI位于染色體3p22～p21.3，全長23.2kb，包含16個外顯子，啟動子區富含GC，并包含TATA盒。β-catenin是一種相對分子質量為92000的多功能蛋白質，擁有獨特的N端和C端，其間含有12個Armadillo(arm)重復區。β-catenin的N端包含130個氨基酸殘基，富含絲氨酸和蘇氨酸殘基，這些殘基易被磷酸化而降低β-catenin的穩定性，當編碼這些殘基的DNA序列發生突變或缺失時，β-catenin的穩定性增加；其C端包含100個氨基酸殘基，酸性較強，含有T細胞因子(T cell factor,TCF)家族轉錄因子結合位點，調節下游靶基因的轉錄；中間為12個arm序列，每個arm序列均由42個氨基酸殘基組成，12個arm共形成3個α螺旋，最后多個α螺旋相互作用進而形成右手超螺旋；N端和C端分別附著于由arm組成的短棒上，從而使整個β-catenin看起來如同一個啞鈴。這種結構在其與鈣粘蛋白(cadherin)、大腸腺瘤息肉蛋白(adenomatous polyposis coli,APC)、支架蛋白(Axin)、TCF/淋巴增強因子(lymphoid enhancer factor,LEF)等結合的過程中發揮重要作用。

β-catenin作為一種多功能蛋白質，在細胞粘附以及Wnt信號通路介導的基因表達調控中均發揮著非常重要的作用。β-catenin的功能主要包括以下兩方面：(1)作為粘著連接的組成部分參與細胞間粘附。細胞膜上的β-catenin可與E-鈣粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的胞漿結構域結合，形成E-cadherin/β-catenin復合物，從而介導同型細胞間的相互粘附。當β-catenin的表達上調時，細胞間的粘附作用增強，以維持細胞的正確空間定位；相反，當β-catenin的表達下調時，細胞間的粘附被破壞，更容易發生遷移和運動。(2)作為Wnt信號通路中關鍵的調控分子，在胚胎發育和腫瘤的發生/演進中扮演重要的角色。當Wnt蛋白與卷曲蛋白(frizzled,Fz)結合后，在低密度脂蛋白受體相關蛋白(LDL-receptor-related protein,LRP)受體的協同作用下，使胞內的蓬亂蛋白(dishevelled,Dsh或DV1)發生磷酸化，從而抑制糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的活性，進而減少β-catenin的降解，導致β-catenin在胞漿中積累并進入細胞核與TCF/LEF結合，促進靶基因的轉錄。

發明內容

發明人提供了一種抗β-catenin蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。