[發明專利]抗CD23蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011447444.1
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112442124B
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發明（設計）人: 黃信超;楊清海;高惠然;李恢波;吳茂;王小亞
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及生物檢測領域，提供了一種抗CD23蛋白單克隆抗體,其重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。用于免疫小鼠的抗原為重組蛋白，所述重組蛋白由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列編碼，經由大腸桿菌重組表達。發明人還提供了一株分泌抗CD23蛋白的雜交瘤細胞系，所述細胞系為小鼠雜交瘤細胞系9D11B6E6，保藏號為：CGMCC NO.19689。抗CD23蛋白單克隆抗體,具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達CD23蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及抗CD23蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用。

背景技術

CD23也稱FcεRII，是人和脊椎動物的IgE低親和力受體，即IgE的II型受體；它是一種廣泛分布于B細胞、嗜酸粒細胞(EOS)、激活的單核/巨噬細胞、血小板、濾泡樹突狀細胞、朗格漢斯細胞(Langhans Cells)、表皮角細胞、胸腺上皮細胞、部分T細胞、自然殺傷細胞等細胞膜表面的跨膜糖蛋白。分子量為45kDa。，屬于典型II型穿膜糖蛋白，由321個氨基酸組成，包括由23個氨基酸殘基組成的胞內N-末端、21個氨基酸殘基組成的穿膜區及277個氨基酸殘基組成的的C-末端膜外區；其羧基末端位于細胞外，氨基末端位于細胞內，屬于C型動物凝集素超家族。

人CD23基因位于19號染色體上，是單拷貝基因，有兩種類型，由于它們的啟動基因不同造成所編碼的CD23分子氨基末端的6個氨基酸不同，形成了兩種CD23：CD23a和CD23b。CD23a主要在B淋巴細胞和嗜酸性細胞中表達，而CD23b在激活的單核/巨噬細胞、B細胞、嗜酸性粒細胞、血小板、濾泡樹突狀細胞、朗格漢斯細胞、表皮角細胞、胸腺上皮細胞、部分T細胞、自然殺傷細胞及某些白血病細胞上都有表達。骨髓腔基質來源的巨噬細胞高表達CD23b。細胞膜表面CD23可由自身或被蛋白水解酶裂解為多種大小不等的可溶性片段，稱為可溶性CD23(sCD23)，這些片段大部分仍可與IgE結合，且表現出與IgE無關的多種功能。

CD23是多功能受體分子/細胞因子，它參與調節IgE的合成、促進B細胞激活、增殖和分化，并通過與膜CD21的結合介導B-T細胞相互作用、增強B細胞向T細胞提呈抗原，促進T細胞成熟。可溶性CD23(sCD23)還可協同IL-1促進胸腺細胞、骨髓前體細胞、生發中心B細胞增殖和分化，抑制單核細胞游走，誘導單核細胞釋放TNF-α、IL-1和IL-6。CD23表達于外周血細胞的某些亞群、B淋巴細胞和EB病毒轉染的B淋巴瘤細胞系，在慢性淋巴細胞白血病和部分中心母細胞淋巴瘤中也有0表達；可能通過促進B細胞活化、分化、成熟、防止生發中心B細胞凋亡，使B細胞出現高反應性、合成和分泌自身抗體、引起自身免疫。可溶性CD23(sCD23)與支氣管哮喘關系密切，在細胞間粘附、抗原的呈遞、T和B細胞的活化、IgE合成、哮喘相關基因的轉錄等過程中可能發揮重要作用。

CD23與Bc、Tc的增殖與分化有密切關系，同時與許多疾病有關，如:鼻咽癌、慢性B淋巴細胞白血病，這些細胞表面可表達CD23分子。國際上已研制出一些抗人CD23單抗，但抗體種類有限，研制CD23單抗不僅可彌補國際上抗體種類的不足，還填補了國內空白，解決抗體來源困難問題。

發明內容

發明人提供了一種抗CD23蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區氨基酸序列分別是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所編碼。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別CD23蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。