[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的成套試劑與方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011446988.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112481415A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍建
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 邁基諾(重慶)基因科技有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6813;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.成套探針組，其由80條探針組成；

所述80條探針為如下A1)-A3)中任一種：

A1)所述80條探針?lè)謩e為序列表中序列1至序列80所示的探針；

A2)所述80條探針?lè)謩e為序列表中序列1第16-135位至序列80中的第16-135位所示的探針；

A3)將A1)或A2)中每條探針經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成套探針組，其特征在于：所述80條探針等摩爾質(zhì)量混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成套探針組，其特征在于：所述每條探針的5’端均標(biāo)記有功能基團(tuán)。

4.用于檢測(cè)或輔助檢測(cè)乙型肝炎病毒的試劑盒，包括權(quán)利要求1-3中任一所述成套探針組。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括如下獨(dú)立包裝的含有引物1和引物2的富集緩沖液、雜交緩沖液、結(jié)合緩沖液、漂洗液1、漂洗液2、0.1M NaOH水溶液、1M且pH值為7.5的Tris-HCl緩沖液、含有引物3和引物4的PCR反應(yīng)液和TE緩沖液中的至少一種；

所述富集緩沖液中的溶質(zhì)包括人cot-1DNA、鮭魚(yú)精DNA、引物1和引物2；

所述引物1為序列表中序列81所示的單鏈DNA，所述引物2為序列表中序列82所示的單鏈DNA；

所述雜交緩沖液包括NaCl、檸檬酸鈉、BSA和Tween20；

所述結(jié)合緩沖液包括NaCl和EDTA；

所述漂洗液1包括SDS和SSC溶液；

所述漂洗液2包括SDS和10倍稀釋的SSC溶液；

所述PCR反應(yīng)液包括引物3和引物4；

所述引物3和所述引物4的序列分別為序列表中序列84和85，

所述TE緩沖液包括三羥甲基氨基甲烷和EDTA。

6.權(quán)利要求1-3任一所述成套探針組或權(quán)利要求4-5中任一所述試劑盒在制備具有如下B1)-B9)至少一種功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用：

B1)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)患者是否患有乙型肝炎病毒；

B2)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)患者乙型肝炎病毒分型種類(lèi)；

B3)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有乙型肝炎病毒；

B4)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣本中乙型肝炎病毒分型種類(lèi)；

B5)檢測(cè)或輔助檢測(cè)乙型肝炎病毒分型種類(lèi)；

B6)檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)患者或待測(cè)樣本中乙型肝炎病毒的整合位點(diǎn)；

B7)檢測(cè)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA在人基因組中插入位點(diǎn)；

B8)捕獲乙型肝炎病毒DNA；

B9)檢測(cè)乙型肝炎病毒基因組序列。

7.下述任一方法：

C1)捕獲待測(cè)樣本中乙型肝炎病毒DNA的方法，包括：利用權(quán)利要求1-3任一所述成套探針組或權(quán)利要求4-55中任一所述試劑盒對(duì)待測(cè)樣本的基因組DNA進(jìn)行捕獲，得到捕獲片段；實(shí)現(xiàn)捕獲待測(cè)樣本中乙型肝炎病毒DNA。

C2)檢測(cè)乙型肝炎病毒基因組序列的方法，包括：利用權(quán)利要求1-3任一所述成套探針組或權(quán)利要求4-5中任一所述試劑盒捕獲待測(cè)樣本中乙型肝炎病毒基因組DNA，得到捕獲到的基因組DNA，對(duì)所述捕獲到的基因組DNA進(jìn)行測(cè)序，得到乙型肝炎病毒基因組序列；

C3)檢測(cè)乙型肝炎病毒分型的方法，包括：利用權(quán)利要求1-3任一所述成套探針組或權(quán)利要求4-5中任一所述試劑盒捕獲待測(cè)樣本乙型肝炎病毒基因組DNA，得到捕獲到的基因組DNA，對(duì)所述捕獲到的基因組DNA進(jìn)行測(cè)序，得到待測(cè)樣本乙型肝炎病毒基因組序列；將所述待測(cè)樣本乙型肝炎病毒基因組序列與乙型肝炎病毒基因組參考序列進(jìn)行比對(duì)，得到所述待測(cè)樣本的乙型肝炎病毒分型；

C4)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA在人基因組中插入位點(diǎn)的方法，包括：利用權(quán)利要求1-3任一所述成套探針組或權(quán)利要求4-5中任一所述試劑盒捕獲待測(cè)樣本基因組DNA，得到捕獲到的基因組DNA，對(duì)所述捕獲到的基因組DNA進(jìn)行測(cè)序，得到測(cè)序序列；將所述測(cè)序序列與乙型肝炎病毒基因組參考序列以及人參考基因組序列進(jìn)行比對(duì)，確定所述待測(cè)樣本的HBV DNA在人基因組中的插入位點(diǎn)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用或權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述乙型肝炎病毒分型為HBVA、B、C、D、E、F、G和H中的至少一種。