[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011445287.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113080323A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文政
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州和普生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A23K50/30
• 分類(lèi)號(hào): A23K50/30;A23K50/60;A23K10/18;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 深圳市諾正鑫澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44689
• 代理人: 林國(guó)友

1.一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法如下：

步驟一：分離得到蟲(chóng)草靈芝姬松茸復(fù)合菌株；

步驟二：制備改良PDA固體培養(yǎng)基和改良PD培養(yǎng)基；

步驟三：將改良固體PDA培養(yǎng)基加熱融化，待溫度冷卻后，在無(wú)菌的情況倒入培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基冷卻凝固后倒放備用；

步驟四：將蟲(chóng)草靈芝姬松茸復(fù)合菌株在無(wú)菌操作下分別接種于改良培養(yǎng)基上,恒溫培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)15～20d，待菌株長(zhǎng)至近培養(yǎng)皿邊緣時(shí)放置4℃冰箱備用；

步驟五：將長(zhǎng)滿菌株的培養(yǎng)基從冰箱中取出,無(wú)菌條件下用滅菌牙簽挑取少量粉色的分生孢子，接種至裝有滅好菌的改良PD液體培養(yǎng)基的錐形瓶中；

步驟六：將含有不同交配型的接種好的錐形瓶放在搖柜中進(jìn)行搖培,然后恒溫震蕩培養(yǎng)3～4d,獲得許多含有小米粒的菌絲球的少量種子菌懸液；

步驟七：將種子菌懸液轉(zhuǎn)移至發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵制得蟲(chóng)草靈芝姬松茸復(fù)合發(fā)酵液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述分離得到蟲(chóng)草靈芝姬松茸復(fù)合菌株：在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)供試的蟲(chóng)草菌株、靈芝菌株和姬松茸菌株進(jìn)行單子囊孢子分離，然后通過(guò)分子生物學(xué)鑒定和人工篩選得到蟲(chóng)草靈芝姬松茸復(fù)合菌株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述制備改良固體培養(yǎng)基制備如下：通過(guò)馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、瓊脂16g、磷酸二氫鉀2g、七水硫酸鎂1g和復(fù)合V_B25mg進(jìn)行混合,用水補(bǔ)至1000mL,pH值為6.5-7。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述改良PD培養(yǎng)基制備如下:將馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、復(fù)合V_B25mg進(jìn)行混合，補(bǔ)水至pH值6.5～7.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述步驟六中搖培轉(zhuǎn)速為170r/min，溫度條件為20-22℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述步驟四中溫度條件為20-22℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述步驟七中發(fā)酵條件為溫度20-25℃,pH值為6.0～6.5,通氣量為1mL/min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高仔豬免疫力的蟲(chóng)草發(fā)酵液制備方法，其特征在于：所述步驟三中冷卻后的溫度條件為55-60℃。