[發明專利]一種人臍帶、羊膜和胎盤樣本的通用保存液及其制備方法

有效

• 申請號: 202011438054.8
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112471138B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 張玲潔;吳基偉;鄭婕
• 申請（專利權）人: 杜德（江門）生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 蘇云輝

本發明屬于干細胞技術領域，尤其涉及一種人臍帶、羊膜和胎盤樣本的通用保存液及其制備方法。本申請的通用保存液中，DMEM基礎培養基為樣本的間充質干細胞提供最基礎的營養；胰島素能促進樣本間充質干細胞對通用保存液中的糖分進行吸收和利用，維持細胞活性；人血白蛋白為間充質干細胞提供動態平衡，維持細胞滲透壓；維生素C能防止長時間的氧化產生的自由基對間充質干細胞造成損傷；EGF能促進間充質干細胞增殖，維持細胞原有形態。實驗結果表明，本保存液可用于長時間保存臍帶、羊膜和胎盤，獲取的間充質干細胞數量多、活率高，且人血白蛋白、胰島素、維生素C和EGF在提高保存臍帶中間充質干細胞數和間充質干細胞活率具有協同作用。

技術領域

本發明屬于干細胞技術領域，尤其涉及一種人臍帶、羊膜和胎盤樣本的通用保存液及其制備方法。

背景技術

間充質干細胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的細胞，又稱多潛能基質細胞，簡稱MSCs，是屬于中胚層的一類多能干細胞，主要存在于結締組織和器官間質中，包括：骨髓、臍帶、脂肪、羊膜、牙髓、胎盤等。在適宜條件下可分化為脂肪、骨、軟骨等多種組織細胞。與骨髓來源的MSC相比，臍帶、羊膜和胎盤來源的間充質干細胞因其取材方便，無道德倫理爭議，可獲取的細胞數量多、增殖能力強、免疫調節作用大，分泌細胞生長因子的總量也非常高，便于擴增和傳代，同時又沒有配型、排異等問題，極其適合用于臨床研究和應用，是間充質干細胞的理想來源。

但是，間充質干細胞需要通過樣本在GMP實驗室中制備分離、高效提純和快速擴增后，才能產出符合標準的細胞。所以，樣本的安全保存就成為了間充質干細胞產出的基本要求。而樣本從醫院產房到GMP實驗室，少則需要數小時，多則需要數天，這其中樣本會受到諸如時間、溫度、營養等因素的影響，導致樣本中的細胞數量少，活力低。

因此，尋求一種能長時間保存臍帶、羊膜和胎盤的通用保存液一直是本領域技術人員亟待解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種人臍帶、羊膜和胎盤樣本的通用保存液及其制備方法，本通用保存液可用于長時間保存臍帶、羊膜和胎盤，獲取的間充質干細胞數量多、活率高。

本發明的具體技術方案如下：

一種人臍帶、羊膜和胎盤樣本的通用保存液，所述通用保存液由DMEM基礎培養基、胰島素、人血白蛋白、維生素C、EGF、青霉素、鏈霉素和肝素鈉組成；

所述通用保存液的pH值為7.5～7.8。

優選的，所述胰島素在所述通用保存液中的濃度為10-20mg/L；

所述人血白蛋白在所述通用保存液中的濃度為10-15g/L；

所述維生素C在所述通用保存液中的濃度為100-200mg/L；

所述EGF在所述通用保存液中的濃度為10-50μg/L。

優選的，所述胰島素在所述通用保存液中的濃度為10mg/L；

所述人血白蛋白在所述通用保存液中的濃度為10g/L；

所述維生素C在所述通用保存液中的濃度為100mg/L；

所述EGF在所述通用保存液中的濃度為10μg/L。

優選的，所述青霉素在所述通用保存液中的濃度為50000-100000U/L；

所述鏈霉素在所述通用保存液中的濃度為50-100mg/L；

所述肝素鈉在所述通用保存液中的濃度為6250-12500U/L。

優選的，所述青霉素在所述通用保存液中的濃度為100000U/L；

所述鏈霉素在所述通用保存液中的濃度為100mg/L；