[發明專利]一種核酸純化輔助劑及使用方法

有效

• 申請號: 202011433920.4
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112522250B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 胡全安;曹雪松;郭尚敬;張壯;張錢錢;孫雯雯;來慶雪
• 申請（專利權）人: 聊城大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 高維波

本發明提供一種核酸純化輔助劑及使用方法，所述輔助劑為聚丙烯腈粉，其添加量為核酸提取液的3?8%，可顯著改進核酸純化方法，其優點為：便于操作，提高得率和純度，降低污染，同時減少了操作人員與有害苯酚的接觸概率。

技術領域

本發明屬于核酸純化技術領域，具體為一種核酸純化輔助劑及使用方法。

背景技術

分子生物學實驗室中，最常用的核酸純化方法有兩種，一種是使用苯酚抽提，另一種是基于silica的純化方式。盡管后者被越來越到的實驗室采用，但前者因操作簡單、成本低廉和純化質量高，而仍有較廣泛的使用和發展空間。

在DNA純化的步驟中，水相和有機相之間的蛋白層相對不穩定。在吸取水相的過程中，需要特別小心，避免吸到蛋白層。目前人們通常，將移液器槍頭的末端剪掉1~2mm，以增大其口徑，減少其單位面積上的吸力，進而更平緩地轉移上層水相；或者，盡量少吸取一些水相，以犧牲得率為代價換取較高純度的DNA，二者均不甚方便。

基于上述問題，目前需針對苯酚抽提的操作方法進行改進。

發明內容

（一）解決的技術問題

為解決現有的，苯酚抽提法核酸純化不方便的問題，本發明提供一種輔助劑，可顯著改進核酸純化方法，其優點為：便于操作，提高得率和純度，降低污染，同時減少了操作人員與有害苯酚的接觸概率。

（二）技術方案

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種核酸純化輔助劑，所述輔助劑為聚丙烯腈粉。

優選方案為，所述聚丙烯腈粉的添加量為核酸提取液的3-8%。

一種核酸純化輔助劑的使用方法，包括如下步驟：

S1.?在核酸提取液中，加入終濃度為5%的輔助劑；

S2.?將步驟S1所得溶液按照核酸提取步驟，采用苯酚或苯酚-氯仿抽提，離心后其水相與有機相之間形成一層白色的（輔助劑+蛋白質）界面；

S3.?使用移液器將界面以下的有機相移除，無需更換試管；

S4.?加入氯仿抽提，以去除殘余的苯酚；

S5.?吸取上層水相至新的試管或容器，加入乙醇或異丙醇沉淀核酸。

本發明的有益效果是：

1.方便操作，輔助劑的加入，可以加固水相和有機相之間的界面，并使該界面更加清晰，使操作更加簡單。

2.因為中間界面更加清晰牢固，相比較傳統方法中容易坍塌的界面，可以減少界面中蛋白的污染，并能提高核酸的回收得率。

3.清晰牢固的中間界面，減少了操作者接觸有害有機相的機率，更利于健康。

附圖說明

圖1為聚丙烯腈對苯酚/氯仿抽提過程的輔助影響效果圖；

圖2為不同方法提取純化的質粒DNA酶切比較圖。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步詳細說明。

實施例1：細菌基因組DNA的提純，步驟如下：

S1.?轉移1.5ml過夜培養（LB液體培養基）的E.coli培養物到1.5ml?Eppendorf管，最大離心轉速離心1分鐘，收集細菌細胞，去上清；