[發明專利]一種尿微量白蛋白檢測試劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202011431413.7
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112698040A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 沃燕波;施美霞;劉興艷;湯曉;劉艷;陳樂樂;鄔智喜
• 申請（專利權）人: 寧波職業技術學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/546
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 毛洪梅

本發明提供一種尿微量白蛋白檢測試劑及其制備方法，包括試劑1和試劑2；試劑1的組分和濃度如下：三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液：200?500mM；聚乙二醇二琥珀酸：5?8g/L；月桂酰胺丙基羥磺基甜菜堿：1?5g/L；肌醇：0.1?0.5g/L；曲拉通X?100：0.1?0.5g/L；疊氮化鈉：0.1g/L；溶劑為純化水，試劑1的PH為6.5～7.5；試劑2的組分和濃度如下：三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液：50?200mM；氯化鈉：20?40g/L；氯化鉀：20?40g/L；羊抗人尿微量白蛋白抗體包被膠乳顆粒：1?3％；椰油酸二乙醇酰胺：2?5g/L；聚甘油?3?甲基葡糖二硬脂酸酯：2?5g/L；肌醇：0.1?0.5g/L；曲拉通X?100：0.1?0.5g/L；疊氮化鈉：0.1g/L；溶劑為純化水，試劑2的PH為6.5～7.5。本發明檢測靈敏度高，可報告范圍廣，穩定性好。

技術領域

本發明屬于一種尿微量白蛋白檢測試劑及其制備方法，具體涉及尿微量白蛋白檢測領域。

背景技術

1982年Viberti等發現了糖尿病患者尿中總蛋白在正常范圍，而尿白蛋白排泄增加的現象，首先提出了尿微量白蛋白的概念，并指出這種蛋白的出現是腎病發生的早期預兆。隨著檢測技術的進步，目前尿微量白蛋白主要用于對糖尿病、高血壓患者的早期監測，以便及時采取保護腎功能的措施，如限制蛋白的攝入量、禁煙、及時控制血糖和血壓等。因此，及時檢測尿微量白蛋白，對控制和防止早期腎病的發生極為重要。

正常情況下，尿是在腎臟內形成的。體內血流經腎小球毛細管時，其中的細胞、大分子蛋白質和脂類等膠體被截留。病理情況下，由于腎小球內壓力增高濾過增加或是基底膜改變，導致高濾過率而出現蛋白尿。健康成年人尿微量白蛋白參考區間為＜30mg/L，當值介于30-200mg/L時則為微量白蛋白尿期，臨床可診斷為早期糖尿病腎病，一般認為此時病變經治療尚可復原，尿微量白蛋白可轉為陰性。當值＞200mg/L，診斷為糖尿病腎病，需對糖尿病人早期采取保護腎功能的措施，限制蛋白攝入，控制血糖、血壓、禁煙，防止進入不可逆轉期(值＞300mg/L)。由于正常人尿液中的尿微量白蛋白含量較低，因此對檢測試劑的靈敏度要求較高，又因糖尿病腎病病人進入不可逆轉期時尿中尿微量白蛋白含量可達300mg/L以上，因此對檢測試劑的可報告范圍也有適當要求，以便減少樣本稀釋的工作量，提高檢測效率。

目前市場上尿微量白蛋白的檢測方法有免疫擴散法、免疫電泳法、免疫比濁法、放射免疫法、酶聯免疫吸附法、膠體金法等。其中免疫擴散法、免疫電泳法、酶聯免疫吸附法主要靠手工操作，步驟繁瑣且準確度、批間差異大，檢測時間長，不適合醫院檢驗科使用。放射免疫法準確度較高，但價格昂貴，操作繁瑣。膠體金法因受自身方法學的局限，一般只能達到定性診斷，不能滿足醫生定量需求，另外由于試紙很難做到結構均勻一致，材料、薄厚、疏密程度也很難完全相同，致使樣本檢測結果在不同測試卡上的重復性較差。所以現在多采用免疫比濁法測定。膠乳免疫比濁法屬于普通免疫比濁技術的衍生技術，克服了普通免疫比濁技術信號量非常有限的缺點，使抗體體積有了數量級上的增長，大幅提升了可檢測性，但該方法也存在不足之處，如膠乳微球的粒徑大小對試劑的測試性能會產生較大影響，粒徑過大，由于微球表面積跟自身體積比率小，易造成單位體積內抗體包被量小，導致抗原過剩，無法對濃度高的分析物進行檢測，粒徑過小則膠乳表面積跟自身體積比率大，不易產生凝集現象，導致吸光度變化緩慢，試劑的檢測靈敏度降低。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測靈敏度高，可報告范圍廣，穩定性好的膠乳免疫比濁法尿微量白蛋白檢測試劑及其制備方法。

本發明提供了如下的技術方案：

一種尿微量白蛋白檢測試劑及其制備方法，包括試劑1和試劑2；

試劑1的組分和濃度如下：

三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液：200-500mM

聚乙二醇二琥珀酸：5-8g/L

月桂酰胺丙基羥磺基甜菜堿：1-5g/L