[發(fā)明專利]多色熒光信號打開型競爭免疫層析試紙條制備及檢測裝置

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011431320.4
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112326959A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江湖;熊勇華;冷遠(yuǎn)逵;賴衛(wèi)華;李響敏;聶麗娟
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種多色熒光信號打開型競爭免疫層析試紙條制備及檢測裝置，試紙條以“紅、橙、黃、綠、藍(lán)”五色量子點(diǎn)熒光作為五種真菌毒素檢測線背景信號，銀納米粒子分別與五種真菌毒素的單克隆抗體結(jié)合作為量子點(diǎn)激發(fā)光的內(nèi)濾探針，抗兔IgG與兔IgG作為獨(dú)立對照線體系。檢測時試紙條插入熒光讀取盒，通過智能手機(jī)APP分析熒光信號，以各檢測線熒光信號強(qiáng)度與對照線熒光信號強(qiáng)度比值準(zhǔn)確定量。本發(fā)明可用于同時快速定量檢測糧油制品中黃曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及伏馬菌素B₁等五種真菌毒素。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于多色熒光“信號打開”型競爭免疫層析試紙條及其檢測裝置。

背景技術(shù)

我國是糧食生產(chǎn)和消費(fèi)大國，加強(qiáng)糧食的質(zhì)量控制意義重大。我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)（2017）對谷物中四種真菌毒素制定了限量要求：黃曲霉毒素B₁（aflatoxin B₁, AFB₁）5~20μg/kg、赭曲霉毒素A（ochratoxin A, OTA）5μg/kg、玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）60μg/kg和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol, DON）1000μg/kg。此外，由于伏馬菌素（Fumonisin）的毒性及污染的嚴(yán)重性，2019年食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)真菌毒素限量征求意見稿中增加了伏馬菌素B₁，B₂和B₃總量的限量要求：玉米、玉米面（渣）和含有玉米原料的谷物制品限量分別為4000、2000和1000μg/kg。建立同時檢測多種真菌毒素的高靈敏快速檢測方法對維護(hù)食品安全具有重要意義。

免疫層析方法因具有操作簡便、快速、抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是現(xiàn)場快速篩查的常用方法。真菌毒素屬于小分子物質(zhì)，在免疫層析中通常使用競爭反應(yīng)模式。此方法待檢物數(shù)量與檢測線上信號強(qiáng)度成反比，通常以檢測線（T線）上“信號消失”作為判讀標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度不高。構(gòu)建基于“信號打開”模式的競爭免疫層析技術(shù)，即檢測信號隨著小分子待檢物濃度增大從無到有，可顯著提高方法學(xué)檢測靈敏度。

有學(xué)者提出基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的“信號打開”型免疫層析方法，其靈敏度較傳統(tǒng)的競爭免疫層析更高。而FRET只能作用于熒光物質(zhì)發(fā)射光，對于多色熒光構(gòu)建“信號打開”模式的競爭免疫層析，需要多種吸收光譜的能量受體，而不同吸收光譜的納米粒子在形貌、大小、生物相容性、適合的pH值及緩沖液鹽濃度等方面存在較大差異，不適合在同一試紙條上統(tǒng)一使用。因此，基于FRET的“信號打開”模式的競爭免疫層析不適合于多色熒光指示的多重檢測。

針對該問題，本發(fā)明提出基于內(nèi)濾效應(yīng)（IFE）的“信號打開”型競爭免疫層析試紙條，IFE是指貴金屬納米粒子對熒光物質(zhì)特定激發(fā)光或發(fā)射光強(qiáng)烈的吸收效應(yīng)，由于IFE可以作用于激發(fā)光，而一些熒光物質(zhì)如量子點(diǎn)具有寬激發(fā)光譜的特性，因此可以通過對單一激發(fā)光的IFE實現(xiàn)多色熒光的“信號打開”。

IFE體系的靈敏程度主要與以下三個要素密切相關(guān)：第一，吸收劑的吸收光譜與熒光劑的激發(fā)或發(fā)射光譜有效的重疊（此為必要條件），且重疊程度越高，IFE越顯著；第二，吸收劑的摩爾消光系數(shù)，摩爾消光系數(shù)越高表明其對光的吸收越強(qiáng)烈，從而IFE越顯著；第三，熒光劑的性能，熒光作為體系的輸出信號，熒光劑發(fā)光強(qiáng)度越高、穩(wěn)定性越好，IFE導(dǎo)致的熒光信號變化程度越大，即體系越靈敏。