[發明專利]一種榛屬植物品種SSR分子標記指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 202011428987.9
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112442545B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 馬慶華;趙天田;梁麗松;王貴禧;楊振
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都方圓聿聯專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 茍銘

本發明公開了一種榛屬植物品種SSR分子標記指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟：(1)提取參選品種的榛屬植物DNA；(2)使用25對核心SSR分子標記引物分別對待測品種進行多重PCR擴增，(3)將步驟(2)的擴增產物進行分組，然后按組混合進行毛細管電泳檢測；(4)對檢測結果進行數據分析構建出指紋圖譜。本發明中核心引物多態性強、數據讀取簡易，兼容榛屬植物各個種，具有強大的辨別功能；通過引物混合PCR技術，一次PCR可獲得2組引物的產物，節約1倍的PCR成本；通過PCR產物混合毛細管電泳技術，一次電泳可同時獲得4?8組引物的數據信息，節約3?7倍的毛細管電泳費用，從而實現了對實驗操作節約成本、經濟快捷的目的。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種榛屬植物品種SSR分鐘標記指紋圖譜的構建方法。

背景技術

榛屬(Corylus)植物屬于樺木科(Betulaceae)榛族，在世界范圍內被廣泛認可的有13 個野生種，廣泛栽培的榛子品種為歐洲榛(C.avellana L.)及其與大果榛(C.maximaMill.) 的雜交后代，主要品種有：‘Tombul’(土耳其)，‘TGDL’(意大利)，‘Barcelona’(美國)，‘Jefferson’(美國)，等。

中國原產榛屬植物有8個種和2個變種，其中90％以上是野生平榛(C.heterophyllaFisch.)。主要栽培的是平歐雜種榛和少量園藝化栽培的平榛。平歐雜種榛(CorylusheterophyllaFisch.×Corylusavellana L.)是20世紀80年代國內專家利用我國平榛和國外歐洲榛種間雜交獲得的雜交后代，迄今近40年來，先后審定和篩選了10余個品種和 30余個優良品系，具有果大、豐產、出仁率高、果仁飽滿、適應性強等特點，被廣泛引種至全國各地，目前，全國栽培面積近120萬畝。

隨著平歐雜種榛產業的迅速發展，在科研和產業方面存在一些問題亟待解決：首先，現有平歐雜種榛品種(品系)篩選自多個母本和父本的混合后代群體，品種(品系)間的親緣關系非常復雜，有些品種(品系)難以區分；第二，雜交育種是榛子種質創新的主要手段，各單位的雜交育種工作一直持續進行，候選群體的親子鑒定工作亟待開展；第三，目前各單位陸續開始審定新品種，新品種的鑒定工作急需精準快捷的技術；第四，生產上平歐雜種榛苗木的品種混雜和同物異名問題尤為普遍，混雜品種或適應性較差，或與授粉品種不親和，均導致了種植者蒙受巨大的經濟損失。

因此，急需簡單、精準、快捷的品種鑒定技術應用到榛屬品種生產和科研上來。

表觀性狀鑒定技術被很多基層單位和種植戶所采用，依靠堅果外觀結合樹體性狀進行辨別，如堅果大小、性狀、顏色、外觀條紋；種仁形狀、顏色、脫皮性；樹勢、枝干開張角度、分枝特性；枝條顏色、皮孔、茸毛；葉片大小、形狀、顏色；果苞長短、形狀、開張情況；葉芽形狀、顏色、鱗片；雌花顏色、雌蕊數量；雄花序葇荑花序數、形狀、顏色等。表觀性狀鑒定法鑒別品種周期長且季節性強，而且受栽培因素的影響，不同地區的樹體發育和堅果外觀存在一定差異，從而影響了對表型性狀的判斷。

分子標記技術具有準確、高效、重復性強的優點，是研究植物遺傳多樣性、親緣關系和品種鑒定最常用的方法，國內學者先后采用RAPD、ISSR和AFLP技術在平歐雜種榛品種(品系)的遺傳關系方面進行過研究，報道了平歐雜種榛群體的遺傳多樣性。

RAPD技術：劉振盼等利用RAPD標記技術，對遼寧8個雜交榛子主栽品種進行指紋分析。從60個10堿基隨機引物中篩選重復性好的3個引物OPF05、OPG01、OPH07，選取7 個條帶作為品種鑒別的RAPD標記，以此構建榛子優良品種的指紋圖譜。