[發(fā)明專利]一種基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011428540.1
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112402357A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 卓鑫杰;羅麗曉;姚玲玲;羅保君;楊苗;孟德龍;宋丹
• 申請（專利權(quán)）人: 煥生匯生物基因技術(shù)（北京）有限公司
• 主分類號: A61K8/99
• 分類號: A61K8/99;A61K8/92;A61K8/9789;A61K8/73;C12N5/0775;A61Q19/00;A61P29/00;A61P17/00
• 代理公司: 西安中科匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 61254
• 代理人: 汪重慶

1.一種基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)；

步驟2，富含臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體的原液的制備，記為B液，低溫保存，備用；

步驟3，基底液的配制，記為C液；

步驟4，按體積比9:1將B液和C液使用，即可。

2.如權(quán)利要求1所述的基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法，其特征在于，步驟1中，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)的具體步驟為：采集足月剖宮產(chǎn)新生兒臍帶剪成2-3cm小段，清洗后剝出華通膠剪至1mm²小塊，均勻鋪于培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO₂濃度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，8-24h內(nèi)加入15ml完全培養(yǎng)基覆蓋組織塊，培養(yǎng)至第五天半換液，此后每隔2-3天換液，細(xì)胞融合度達(dá)到70-80％時，吸出組織塊加到一個新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加培養(yǎng)基到15ml，1-2天后觀察新的細(xì)胞從組織塊周圍爬出，融合度達(dá)到70％-80％左右時進(jìn)行傳代，記為P1，持續(xù)傳代操作，獲得二次貼壁細(xì)胞的P2代到P5代作為實驗用的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1所述的基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法，其特征在于，步驟2中，所述富含臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體的原液的制備具體步驟如下：接種生長狀態(tài)良好的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞5X106-175平方厘米的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，使用無血清的商品化干細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞的融合度達(dá)到80％-90％時，收集培養(yǎng)上清液；

將上清液2000g，4℃離心8-10min去除完整細(xì)胞和死細(xì)胞碎片，獲得上清液A；

將上清液A分別用0.45μm和0.22μm濾器過濾，得到富含外泌體的原液B。

4.如權(quán)利要求1所述的基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法，其特征在于，步驟3中，所述基底液包括以下體積百分比的各組分；

5.如權(quán)利要求1所述的基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的妊娠紋修復(fù)液制備方法，其特征在于，步驟4中，所述使用的方法具體為：

1)取出低溫保存的B液，擠出2-3毫升于手心，輕拍至腹部妊娠紋處；

2)擠出2-3毫升的C液，輕輕在腹部按摩值完全吸收。