[發明專利]一株產酸性蛋白酶的黑曲霉菌株及其應用

有效

• 申請號: 202011427079.8
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112501032B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 王興吉;伏圣秘;王克芬;張法玲;張杰;郭慶文
• 申請（專利權）人: 山東隆科特酶制劑有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N15/01;C12N9/62;C12R1/685
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

本發明屬于生物工程技術領域，特別涉及一株產酸性蛋白酶的黑曲霉突變菌株及其液體發酵技術。本發明中所述的高產酸性蛋白酶的黑曲霉菌株具體為黑曲霉(Aspergillus niger)FSM?208063，該菌株已于2020年9月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.20724。是由一株黑曲霉經亞硝基胍誘變選育獲得。由該菌株生產的酸性蛋白酶在80℃保溫4h后剩余酶活在70％以上，具有良好的耐酸性和耐熱性，可應用于釀酒、食品、飼料以及皮革加工等行業。

技術領域：

本發明屬于生物工程技術領域，特別涉及一株產酸性蛋白酶的黑曲霉突變菌株及其應用。

背景技術：

酸性蛋白酶是一種能在pH值為2.5～5.0環境下水解蛋白質的酶類。酸性蛋白酶對pH值的這種要求，可能與其酶活中心含有的羧基有關。由于酸性蛋白酶具有較好的耐酸性，因此被廣泛地應用于食品、醫藥、輕工、皮革工藝以及飼料加工工業中。

目前商品化的酸性蛋白酶大都來源于微生物，可產酸性蛋白酶的微生物菌株有：齋藤曲霉，泡盛酒曲霉，微小毛霉，青霉，根霉，宇佐美曲霉、黑曲霉、米曲霉、擬青霉、啤酒酵母、乳酸桿菌、枯草桿菌等。其中商品化的酸性蛋白酶生產菌主要是米曲霉，黑曲霉、宇佐美曲霉。

專利CN 201810409771.4公布了一種改變傳統的曲盤結構和液體發酵工藝，采用固體發酵方式來提高酶活力的方法，發酵物料的酶活力達62314.0U/g。

專利CN201510677600.6本發明公布了一株高產酸性蛋白酶的黑曲霉誘變株及其液體發酵方法，所述黑曲霉突變菌株為黑曲霉TP-235，該菌株通過液體深層發酵在50L發酵罐上經補料發酵培養100-120h，產酶水平為21852U/mL。生產的酸性蛋白酶最適pH范圍為2.5-3.5，最適作用溫度范圍為55℃-65℃，在60℃保溫1h后剩余酶活為78％，80℃保溫2h后剩余酶活為58.4％。

專利CN201810014018.5公布了一種酸性蛋白酶及其編碼基因和應用，該蛋白酶的最適pH為3.5，在pH 2.5-pH 3.5范圍內，該酶能夠維持其70％以上的酶活力；最適溫度60℃，在65℃時依然具有60％以上的酶活力。

但是由于受原材料價格上漲及國外同行業中酶活水平的不斷提高，目前國內現有技術中酸性蛋白酶的發酵水平普遍較低，產品的競爭力不足，所以選育一株高產酸性蛋白酶的生產菌株，且所生產的酸性蛋白酶具有良好的耐酸性和耐熱性，對推動新舊動能轉換，產業結構升級具有重大意義。

發明內容：

本發明的目的是提供一株高產酸性蛋白酶的黑曲霉誘變菌株及其液體發酵產酶方法。

本發明中所述的高產酸性蛋白酶的黑曲霉菌株具體為黑曲霉(Aspergillusniger)FSM-208063，該菌株已于2020年9月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.20724。所述菌株是由保藏號為CGMCC NO.10789的黑曲霉經亞硝基胍誘變選育獲得。

本發明所述的液體發酵技術主要包括以下步驟：

1)固體斜面培養基如下：酵母粉5g/L，蛋白胨2g/L，蔗糖40g/L，NaH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.5g/L，KH₂PO₄ 4g/L，酪蛋白2g/L，瓊脂15g/L，其余為水，調節pH至4.0，121℃滅菌20min，備用；

2)液體種子培養基配制如下：大豆濃縮蛋白30g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨 8g/L，蔗糖2g/L，NaH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.5g/L，其余為水,調節pH至4.0，121℃滅菌20min；