[發(fā)明專利]一種探測(cè)重金屬離子的人工抗體制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011423135.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112462049A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏瀟瀟;楊恩;高大明;張立冬;李珂昕;蔡悅;常飛;李丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 合肥學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/545;G01N33/543;G01N33/552;G01N33/53;G01N21/64;C08F292/00;C08F220/56;C08F222/14
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1.一種探測(cè)重金屬離子的人工抗體制備方法，所合成的人工抗體中的納米SiO₂球表面包覆丙烯酰胺與二甲基丙烯酸乙二醇酯聚合物殼層，形成芯-殼結(jié)構(gòu)，其特征在于：印跡殼層識(shí)別位點(diǎn)修飾上熒光素，洗脫了重金屬離子人工抗體殼層中識(shí)別位點(diǎn)形成具有與印跡金屬離子重金屬空間結(jié)構(gòu)相匹配的空穴結(jié)構(gòu)，重新進(jìn)入識(shí)別位點(diǎn)的重金屬離子，捕獲了在識(shí)別位點(diǎn)熒光探針上的電子，利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移機(jī)理，實(shí)現(xiàn)對(duì)重金屬離子的選擇性識(shí)別和敏感性探測(cè)，上述發(fā)明的制備方法包括如下四個(gè)步驟：

1.1第一步是熒光素與硅烷化試劑的偶聯(lián)：首先，將1 ~ 3 mL的硅烷化試劑和5 ~ 15mL無(wú)水乙醇加入到100 mL帶有磨口塞的錐形瓶中，超聲分散5 ~ 10 min后，用精度為萬(wàn)分之一電子天平稱取0.000 ~ 0.0200 g的熒光素加入上述混合液中，將錐形瓶密封后放置在溫度可控的磁力攪拌器上，25 ℃條件下，以500 rpm轉(zhuǎn)速聚合反應(yīng)12 ~ 15 h，得到熒光素與硅烷化試劑的衍生物溶液，稱為溶液A；

1.2第二步是納米SiO₂熒光探針的制備：首先，將3 ~ 6 mL正硅酸乙酯和80 ~ 200 mL無(wú)水乙醇先后加入到250 mL帶有磨口塞的錐形瓶中，超聲分散5 ~ 10 min后，形成混合液，然后，取6 ~ 12 mL溶液A加入到上述混合液中，再次超聲分散5 ~ 10 min后，向混合液中迅速加入12 ~ 24 mL氨水，將錐形瓶密封后放置在溫度可控的磁力攪拌器上，25 ℃下先以750rpm轉(zhuǎn)速攪拌水解縮合反應(yīng)2 ~ 5 min，再以500 rpm轉(zhuǎn)速水解縮合反應(yīng)12 ~ 15 h；將所得到的反應(yīng)產(chǎn)物用50 mL離心管，以8500 rmp轉(zhuǎn)速離心5 min去除未反應(yīng)底物、再用工業(yè)乙醇超聲分散，重復(fù)洗滌3次，最后得到表面修飾熒光素的納米SiO₂熒光探針，在上述熒光探針中加入110 ~ 220 mL去離子水，超聲分散得到單分散的、圓形的表面修飾熒光素的納米SiO₂熒光探針懸浮液，稱為溶液B；

1.3第三步是重金屬離子印跡的熒光探針人工抗體SiO₂@MIPs的制備：將溶液B超聲分散5 ~ 10 min后，量取20 mL上述溶液，以8500 rmp轉(zhuǎn)速離心5 min后，去除去離子水、然后用乙腈超聲分散，反復(fù)3次后，再次用50 mL乙腈超聲分散后轉(zhuǎn)移至250 mL的錐形瓶中，最后用精度為萬(wàn)分之一電子天平分別稱取0.0200 g 重金屬無(wú)機(jī)鹽、0.0150 ~ 0.0300 g的丙烯酰胺和0.0100 ~ 0.0150 g的偶氮二異丁腈，加入上述聚合物懸浮液中，超聲分散5 ~ 10 min后，加入170 ~ 220 μL的二甲基丙烯酸乙二醇酯，混合液中通入10 ~ 15 min的高純氮?dú)猓コ旌弦褐械难鯕夂螅瑢㈠F形瓶的磨口塞涂抹真空脂，密封，并用保鮮膜包裹磨口塞，再用橡皮筋纏繞包扎，最后將密封的錐形瓶放置在程序升溫的搖床中，設(shè)置程序控溫與反應(yīng)時(shí)間分三個(gè)階段，所述如下：（1）60 ℃反應(yīng)2 h；（2）65 ℃反應(yīng)10 h；（3）70 ℃反應(yīng)熟化2 ~3 h。

2.將所得到聚合反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，以8500 rpm轉(zhuǎn)速離心去除未反應(yīng)底物、再用工業(yè)乙醇超聲分散、再離心，反復(fù)3次，最后得到重金屬離子印跡的熒光探針人工抗體SiO₂@MIPs，上述離心洗滌后的人工抗體SiO₂@MIPs中加入50 mL去離子水，超聲分散、備用，稱為溶液C；

1.4第四步是具有對(duì)重金屬離子識(shí)別和探測(cè)功能的熒光探針人工抗體SiO₂@MIPs制備方法：用精度為萬(wàn)分之一電子天平稱取0.0300 ~ 0.0600 g乙二胺四乙酸-二鈉置于上述溶液C中，25 ℃下，以300 rpm轉(zhuǎn)速振搖4 h，然后將混合液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，以8500 rpm轉(zhuǎn)速離心，去除上清液，沉淀物用30 ~ 40 mL去離子水超聲分散、再離心，反復(fù)3次，最后得到具有對(duì)重金屬離子選擇性識(shí)別和敏感性探測(cè)的熒光探針人工抗體的SiO₂@MIPs。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種探測(cè)重金屬離子的人工抗體制備方法，其特征是：所述的制備的人工抗體中的硅烷化試劑是3-氨丙基三乙氧基硅烷。