[發明專利]用于篩選抗應激脅迫肉羊的血清代謝標志物及其應用

有效

• 申請號: 202011420460.1
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112684064B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 朱雯;張子軍;陳興勇;孟祝;徐偉
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 合肥中谷知識產權代理事務所(普通合伙) 34146
• 代理人: 洪玲

1.一種血清代謝標志物在篩選抗應激脅迫肉羊中的應用，所述抗應激脅迫指的是抗熱應激脅迫，其特征在于，通過血清代謝標志物在肉羊血清樣本中的濃度判斷肉羊的抗熱應激性，濃度越低，該肉羊具有抗應激脅迫的能力越大，反之越小；所述血清代謝標志物為吲哚-3-乙酸甲酯，采用超高效液相色譜-質譜聯用分析方法檢測血清樣本中的吲哚-3-乙酸甲酯濃度。

2.一種篩選抗應激脅迫肉羊的方法，所述抗應激脅迫指的是抗熱應激脅迫，其特征在于，步驟包括：

(1)以已知抗應激脅迫肉羊或非抗應激脅迫肉羊血液為標準供試品，以待測肉羊血液作為檢測樣品，經離心獲取血清樣本；

(2)采用超高效液相色譜-質譜聯用分析方法檢測血清樣本中的吲哚-3-乙酸甲酯濃度；

(3)計算標準供試品吲哚-3-乙酸甲酯濃度平均值，作為參考水平，若檢測樣品相比較參考水平低，則檢測樣品比標準供試品具有更高的抗應激脅迫能力，反之具有更低的抗應激脅迫能力。

3.根據權利要求2所述的一種篩選抗應激脅迫肉羊的方法，其特征在于，超高效液相色譜-質譜聯用分析方法的步驟包括：

步驟一：血清代謝物的提取

在血清樣本中加入3倍體積提取液和內標，混勻后-20℃靜置2h，4℃下4000轉離心20min，取上清，獲得血清代謝物；

步驟二：吲哚-3-乙酸甲酯標準品的制備

取吲哚-3-乙酸甲酯標準品溶解配置10nmol/L的標品儲備液，取上述儲備液配置混合標準液，梯度稀釋得到校準溶液；

步驟三：樣品質譜分析

用超高效液相色譜-質譜聯用分析方法檢測血清代謝物和校準溶液；

液相色譜條件：采用Waters 2D UPLC串聯Q Exactive高分辨質譜儀來進行代謝物的分離和檢測，所使用的色譜柱為BEH C18色譜柱，正離子模式流動相為含0.1％體積比甲酸的水溶液作為A液和含0.1％體積比甲酸的100％甲醇作為B液，負離子模式流動相為含10mM甲酸氨的水溶液作為A液和含10mM甲酸氨的95％甲醇作為B液，按體積百分比計，采用以下梯度進行洗脫：0～1min，2％B液；1～9min，2％～98％B液；9～12min，98％B液；12～12.1min,98％B液～2％B液；12.1～15min，2％B液，流速為0.35mL/min，柱溫45℃，進樣量為5μL；

質譜條件：利用Q Exactive質譜儀進行一級、二級質譜數據采集，質譜掃描質核比范圍為70～1050，一級分辨率為70,000，AGC為3e6，最大注入時間為100ms；按照母離子強度，選擇Top3進行碎裂，采集二級信息，二級分辨率為17,500，AGC為1e5，最大注入時間為50ms，碎裂能量設置為：20，40，60eV，離子源參數設置：鞘氣流速為40，輔助氣流速為10，噴霧電壓正離子模式為3.80，負離子模式為3.20，離子傳輸管溫度為320℃，輔助氣加熱溫度為350℃；

步驟四：根據校準溶液的超高效液相色譜串聯質譜檢測結果繪制標準曲線圖，根據標準曲線圖計算得到待測樣品中吲哚-3-乙酸甲酯含量數據。

4.根據權利要求3所述的一種篩選抗應激脅迫肉羊的方法，其特征在于，所述提取液為由體積比為2:1的甲醇:CAN組成。

5.根據權利要求3所述的一種篩選抗應激脅迫肉羊的方法，其特征在于，所述內標為吲哚-3-乙酸甲酯。