[發明專利]一種酶法制備甘油磷脂酰膽堿的方法

有效

• 申請號: 202011419040.1
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112391422B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 李道明;張佳浩;周端;王盼雪;劉寧
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C07F9/09
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 張海平

本發明公開了一種酶法制備甘油磷脂酰膽堿的方法，屬于油脂加工技術領域。在酶與底物接觸后，通過熱處理調控水解產物中sn2?溶血磷脂和sn1?溶血磷脂型的比例，促進sn2?溶血磷脂向sn1?溶血磷脂轉化，進而促進甘油磷脂酰膽堿的生成，大大提高了甘油磷脂酰膽堿的生成速率；此外，反應過程中無需添加任何金屬離子作為輔酶因子，后續分離純化步驟簡單。該方法操作簡單，能夠顯著提高甘油磷脂酰膽堿的生成速率，且反應過程中無需添加金屬離子，后續分離純化步驟簡單，具有良好的經濟效益和工業應用前景。

技術領域

本發明屬于油脂加工技術領域，具體涉及一種酶法制備甘油磷脂酰膽堿的方法。

背景技術

甘油磷脂酰膽堿(L-alpha glycerylphosphorylcholine,L-α-GPC)是體內乙酰膽堿和磷脂酰膽堿合成的膽堿源。前期研究表明，甘油磷脂酰膽堿在治療阿爾茨海默氏癥、小腦性共濟失調、精神分裂癥和雙相情感障礙等方面具有重要的藥用價值，但就作為藥用原料和相關研究而言需要較高純度的甘油磷脂酰膽堿。然而天然來源的甘油磷脂酰膽堿較少，因此研究和開發高純度的甘油磷脂酰膽堿的制備工藝具有重要意義。

目前，制備甘油磷脂酰膽堿的常用方法主要有酶解法、溶劑萃取法、化學合成法和化學醇解法等。傳統的溶劑萃取法、化學合成法和化學醇解法等均面臨著環境污染等方面的挑戰。酶解法因其反應條件溫和、催化特異性高及安全、環保等優點近年來引起了廣泛地關注。Blasi等(Enzyme Microb.Tech.,2006,39:1405-1408)同時采用Lipozyme IM和phospholipase A₂在微乳液體系中催化卵磷脂制備甘油磷脂酰膽堿，反應48h后，甘油磷脂酰膽堿的產率為94％。Bang等(Food Chem.,2016,190:201-206)在正己烷—水雙水相體系中采用phospholipase A₁催化卵磷脂制備甘油磷脂酰膽堿，在優化的反應條件下，甘油磷脂酰膽堿的產率達到100.0％，但反應時間長達30h。為了提高水解反應速率，Zhang等(Eur.J.Lipid Sci.Technol.,2012,114,1254-1260)采用phospholipase A₁在水相體系中催化卵磷脂制備甘油磷脂酰膽堿，反應開始前添加Ca²⁺作為輔酶因子，在優化的反應條件下反應6h，甘油磷脂酰膽堿的產率為94.5％；此外，Zhang等(Eur.Food Res.Technol.,2012,234:485-491)采用華根霉脂肪酶(Rhizopus chinensis lipase)在水相體系中催化卵磷脂制備甘油磷脂酰膽堿，反應開始前添加Ca²⁺作為輔酶因子，在優化的反應條件下反應3.5h，甘油磷脂酰膽堿的產率為96.8％。盡管反應過程中Ca²⁺的添加顯著提高了水解卵磷脂制備甘油磷脂酰膽堿的反應速率，但也增加了后續分離純化的難度(需去除Ca²⁺)。總之，目前酶法水解制備甘油磷脂酰膽堿時，甘油磷脂酰膽堿產率較高，但反應時間較長；盡管通過改變反應體系和添加Ca²⁺能顯著提高水解反應速率，大大縮短反應時間，但增加了后續分離純化的難度。如何同時兼顧高反應速率和簡單的分離純化步驟是酶法催化制備甘油磷脂酰膽堿所需要解決的關鍵技術問題。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種酶法制備甘油磷脂酰膽堿的方法，提高的反應速率，并且簡化了后續分離純化的步驟。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種酶法制備甘油磷脂酰膽堿的方法，包括以下步驟：包括以下步驟：

步驟1：將卵磷脂與去離子水混合后進行乳化；

步驟2：將步驟1得到的混合底物與固定化磷脂酶A₁接觸進行反應；

步驟3：將步驟2得到的反應產物經熱處理后，冷卻，再加入到步驟2反應后的混合底物中；