[發明專利]一種楊樹ERF轉錄因子基因及其應用

在審

• 申請號: 202011418302.2
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112501182A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 王升級;樊艷;韓有志;黨慧
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H5/12;A01H6/00
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種楊樹ERF轉錄因子基因，其特征在于，所述ERF轉錄因子基因為RAP2L15基因，所述RAP2L15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。

2.一種權利要求1所述的楊樹ERF轉錄因子基因在調控楊樹生長發育方面的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述楊樹ERF轉錄因子基因在調控楊樹生長速率和/或葉片形態方面的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述楊樹ERF轉錄因子基因在楊樹中過量表達可使楊樹生長減慢和/或葉片減小；所述楊樹ERF轉錄因子基因在楊樹中抑制表達可使楊樹生長加快和/或葉寬增加。

5.一種轉基因楊樹的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)過表達植物表達載體pART-CAM-RAP2L15的構建

以SEQ ID NO.1所示的楊樹RAP2L15基因序列為模板，利用引物經高保真酶進行PCR擴增，擴增產物經回收后連接至經XhoI和XbaI雙酶切線性化的質粒載體pART-CAM上，篩選得到陽性質粒pART-CAM-RAP2L15；

(2)抑制表達植物表達載體pART27-RAP2L15的構建

以SEQ ID NO.1所示的楊樹RAP2L15基因序列為模板，分別利用正向片段克隆引物和反向片段克隆引物擴增正向片段和反向片段；以pKANNIBAL為骨架載體，所述正向片段插入在酶切位點Xho I和Kpn I之間，所述反向片段插入在酶切位點Hind III和Xba I之間，篩選獲得含有RAP2L15基因靶序列正向片段和反向片段的pKANNIBAL-RAP2L15重組質粒；最后用XhoI和XbaII雙酶切重組質粒pKANNIBAL-RAP2L15和載體pART27，利用T4連接酶連接，篩選獲得陽性質粒pART27-RAP2L15；

(3)采用農桿菌介導的葉盤法轉化楊樹

將步驟(1)和(2)所得陽性質粒pART-CAM-RAP2L15和陽性質粒pART27-RAP2L15分別轉化農桿菌感受態，利用農桿菌侵染法侵染楊樹葉盤，篩選陽性轉基因株系，獲得RAP2L15基因過量表達轉基因楊樹和RAP2L15基因抑制表達轉基因楊樹。

6.如權利要求5所述的轉基因楊樹的構建方法，其特征在于，步驟(1)中所述引物為引物RAP2L15-F2和引物RAP2L15-R2，所述引物RAP2L15-F2的序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物RAP2L15-R2的序列如SEQ ID NO.3所示。

7.如權利要求5所述的轉基因楊樹的構建方法，其特征在于，步驟(2)中所述正向片段克隆引物為RAP2L15-I-F1和RAP2L15-I-R1，所述反向片段克隆引物為RAP2L15-I-F2和RAP2L15-I-R2；所述正向片段克隆引物RAP2L15-I-F1的序列如SEQ ID NO.4所示，所述正向片段克隆引物RAP2L15-I-R1的序列如SEQ ID NO.5所示，所述反向片段克隆引物RAP2L15-I-F2的序列如SEQ ID NO.6所示，所述反向片段克隆引物RAP2L15-I-R2的序列如SEQ IDNO.7所示。