[發明專利]液質聯用快速測定尿液或細胞培養基中稻曲菌素A含量的方法

有效

• 申請號: 202011416964.6
• 申請日: 2020-12-04
• 公開（公告）號: CN112697898B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 劉春生;孫倩;孔任
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

1.一種尿液或細胞培養基中稻曲菌素A的液質聯用檢測方法，包括下述步驟：

(1)樣品預處理：

(a)量取尿液或細胞培養基樣本，加入等體積二氯甲烷溶液渦旋，高速離心，保留上清液待凈化；

(b)用含體積分數為0.5％的甲酸的0.2M乙酸銨溶液稀釋步驟(a)的待凈化液，待凈化液與乙酸銨溶液的體積比為1:1～1:5，稀釋后的待凈化液通過提前活化的HLB小柱，小柱用2mL含體積分數為0.5％甲酸的0.2M乙酸銨溶液淋洗一次，棄去淋洗液；真空泵抽干；然后采用2-4mL 30％甲醇-水溶液洗脫，收集洗脫液；

HLB柱活化條件為：依次量取1-4mL甲醇、1-4mL含有0.5％甲酸的0.2M乙酸銨溶液緩沖液通過HLB柱；

(c)將步驟(b)所得的待凈化液用氨水溶液調節pH至4-6并通過提前活化的WAX柱，并依次采用1-4mL pH＝4-6甲酸溶液、1-4mL甲醇溶液、1-4mL含體積分數為0.2％甲酸的甲醇溶液淋洗小柱，棄去淋洗液，真空泵抽干；最后用1-4mL 1％的氨化甲醇溶液洗脫；所得洗脫液氮氣吹干后用0-10％甲醇-水溶液復溶，高速離心，將上清液轉移至內插管中用于LC-MS/MS檢測；

WAX活化條件為：依次量取2-4mL甲醇、2-4mL pH＝4-6甲酸水溶液通過WAX柱；(2)LC-MS/MS測定樣品中稻曲菌素的含量：

液相色譜采用ACQUITY UPLC HSS T3柱，為2.1mm×100mm,1.8μm色譜柱，流動相A為甲醇，流動相B為0.01％-0.1％甲酸水；柱溫為30-45℃；進樣體積為1-5μL；流速為0.2-0.45mL/min；運行梯度為0min,5％A；0.5min,5％A；7min,40％A；9min,98％A；12min,98％A；12.2min,5％A；15min,5％A；

LC-MS/MS檢測條件為：Waters ACQUITYH-Plus超高效液相色譜串聯TQ-XS三重四級桿質譜進行檢測；其中，質譜采用電噴霧離子源，多反應監測模式檢測掃描目標分析物；

質譜條件：離子源為ESI+，毛細管電壓為1.0KV，脫溶劑溫度為300℃，脫溶劑流速和碰撞氣流速分別為600和150L/h；檢測稻曲菌素A的質譜參數為：

以上所述的方法中，所述的HLB柱的品牌，型號為waters,60mg，3CC；WAX柱購自安譜，CNW,200mg,3CC。