[發(fā)明專利]一種基于SSR標(biāo)記的木納格葡萄種質(zhì)資源親緣鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011408035.0
• 申請日: 2020-12-04
• 公開（公告）號: CN112481406A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 師瑋;鐘海霞;伍新宇;張付春;陳浩宇;孟阿靜;唐懷君
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所;中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 宋紅賓

1.用于構(gòu)建木納格葡萄指紋圖譜的SSR引物，由12對引物對組成，分別命名為MNG03、MNG10、MNG14、MNG15、MNG18、MNG23、MNG26、MNG29、MNG35、MNG1314、MNG6666、MNG9999；

MNG03的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；

MNG10的上游引物序列如SEQ ID No.3所示，下游引物序列如SEQ ID No.4所示；

MNG14的上游引物序列如SEQ ID No.5所示，下游引物序列如SEQ ID No.6所示；

MNG15的上游引物序列如SEQ ID No.7所示，下游引物序列如SEQ ID No.8所示；

MNG18的上游引物序列如SEQ ID No.9所示，下游引物序列如SEQ ID No.10所示；

MNG23的上游引物序列如SEQ ID No.11所示，下游引物序列如SEQ ID No.12所示；

MNG26的上游引物序列如SEQ ID No.13所示，下游引物序列如SEQ ID No.14所示；

MNG29的上游引物序列如SEQ ID No.15所示，下游引物序列如SEQ ID No.16所示；

MNG35的上游引物序列如SEQ ID No.17所示，下游引物序列如SEQ ID No.18所示；

MNG1314的上游引物序列如SEQ ID No.19所示，下游引物序列如SEQ ID No.20所示；

MNG6666的上游引物序列如SEQ ID No.21所示，下游引物序列如SEQ ID No.22所示；

MNG9999的上游引物序列如SEQ ID No.23所示，下游引物序列如SEQ ID No.24所示。

2.權(quán)利要求1所述的SSR引物在構(gòu)建木納格葡萄指紋圖譜中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的SSR引物在木納格葡萄品種鑒定中的應(yīng)用。

4.一種木納格葡萄指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括(1)提取木納格葡萄樣品DNA，(2)以步驟(1)提取的DNA為模板，以權(quán)利要求1所述的SSR引物進行PCR擴增，(3)擴增產(chǎn)物進行毛細(xì)管電泳檢測，(4)數(shù)據(jù)分析處理和圖譜構(gòu)建。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應(yīng)體系為：25uL的總反應(yīng)體系，其中含模板DNA 1μL，Taq Mix 12.5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，dd H₂O 9.5μL；反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s；52℃脫火30s；72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸10min；反應(yīng)產(chǎn)物4℃保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述毛細(xì)管電泳的方法為：將甲酰胺與分子量內(nèi)標(biāo)按100:1的體積比混勻后，取9μL加入上樣板中，再加入1μL稀釋10倍的PCR產(chǎn)物，然后使用測序儀進行毛細(xì)管電泳。