[發明專利]大花紅景天根頸頂端組織獲得再生植株的方法

有效

• 申請號: 202011405132.4
• 申請日: 2020-12-04
• 公開（公告）號: CN112470929B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 趙文吉;賈國夫;何正軍;劉興;童琪;閆利軍;張昌兵;范康;吳婍;澤讓東洲
• 申請（專利權）人: 四川省草原科學研究院;西藏天賜源生物科技有限責任公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都希盛知識產權代理有限公司 51226
• 代理人: 鄭旭;柯海軍

1.大花紅景天根頸頂端組織獲得再生植株的方法，其特征在于，按以下步驟進行：

a、取大花紅景天種子，經消毒后，接種至無菌苗培養基中進行培養，獲得無菌苗；

b、選擇無菌苗的根頸頂端組織為外植體，接種于愈傷組織誘導培養基中培養，獲得愈傷組織，再將愈傷組織轉移至增殖培養基中進行繼代培養；所述根頸頂端組織為根頸靠近芽端0.5～2 cm的組織；

c、選取繼代培養的愈傷組織在分化培養基中進行誘導分化，獲得叢生芽；并進行繼代培養；

d選取繼代培養的叢生芽，將叢生芽從基部切開，將帶有芽點的組織轉接到生根培養基培養，得到生根無菌苗；

e、將生根無菌苗培養至幼苗長出2~4片新葉，進行移栽，得到再生植株；

其中，無菌苗培養基由1/2MS培養基、蔗糖和瓊脂組成，無菌苗培養基的配制方法為：以1/2MS培養基為基底，添加蔗糖和瓊脂，再調整無菌苗培養基的pH為5~6；所述蔗糖添加量為1/2MS培養基總量的2.5~3.5 wt%，瓊脂添加量為1/2MS培養基總量的0.5~1.5 wt%；

愈傷組織誘導培養基由MS培養基、蔗糖、瓊脂、2,4-D、6-BA、KT和IAA組成，愈傷組織誘導培養基的配制方法為：以MS培養基為基底，添加蔗糖、瓊脂、2,4-D、6-BA、KT和IAA，再調整愈傷組織誘導培養基pH至5.5~6.0；所述蔗糖添加量為MS培養基總量的2.5~3.5 wt%，瓊脂添加量為MS培養基總量的0.5~1.5 wt%；配制好的愈傷組織誘導培養基中，2,4-D的濃度為1.0 ~2.0 mg·L^-1、6-BA的濃度為1.0~2.0 mg·L^-1、KT的濃度為0.2~0.8 mg·L^-1、IAA的濃度為0.2~0.25 mg·L^-1；或配制好的愈傷組織誘導培養基中，2,4-D的濃度為0.5mg·L^-1、6-BA的濃度為2.5 mg·L^-1、KT的濃度為0.5 mg·L^-1、IAA的濃度為0.2 mg·L^-1；

所述愈傷組織誘導培養基與增殖培養基相同；

分化培養基由MS培養基、蔗糖、瓊脂、6-BA和IAA組成，分化培養基的配制方法為：以MS培養基為基底，添加蔗糖、瓊脂、6-BA和IAA，再調整分化培養基的pH至5.5~6；蔗糖添加量為MS培養基總量的2.5~3.5 wt%，瓊脂添加量為MS培養基總量的0.8~1.0 wt%；分化培養基中，6-BA的濃度為2.0~3.0 mg·L^-1、IAA的濃度為0.1~0.5 mg·L^-1；

生根培養基由MS培養基、蔗糖、瓊脂、IBA、NAA和IAA組成，生根培養基的配制方法為：以MS培養基為基底，添加蔗糖、瓊脂、IBA、NAA和IAA，再調整生根培養基的pH至5.5~6；蔗糖添加量為MS培養基總量的2.5~3.5 wt%，瓊脂添加量為MS培養基總量的0.5~1.0 wt%；生根培養基中，IBA的濃度為0.5~1.5 mg·L^-1、NAA的濃度為0.1~1.0 mg·L^-1、IAA的濃度為0.1~1.0 mg·L^-1。