[發明專利]貝萊斯芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 202011400935.0
• 申請日: 2020-12-02
• 公開（公告）號: CN112342173B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 李美佳;張亞玉;孫海;張正海;邵財;雷慧霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

本發明屬于微生物領域，具體公開了貝萊斯芽孢桿菌及其應用。本發明所述貝萊斯芽孢桿菌G1S3504，其保藏編號為CGMCC No.20629，該菌株分離自人參根內。室內平板實驗表明，該菌株貝對人參根腐病、人參銹腐病、人參黑斑病、龍膽根腐病，柑橘果實軟腐病等13種真菌都有較強的拮抗作用，抑制率均高于64.37％，且具有溶磷特性，極具開發前景。大田生防實驗表明，G1S3504菌株可有效防治人參根腐病，同時對人參具有明顯的促生作用。

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及貝萊斯芽孢桿菌及其應用。

背景技術

人參(Panax ginseng C.A.Mey)為五加科人參屬多年生宿根草本植物，具有較高的藥用價值和經濟價值，是我國傳統的名貴中藥材。我國人參栽培歷史悠久，然而由于人參栽培技術不夠完善，導致人參真菌性病害問題頻發，使人參產量明顯下降，質量降低，病害發生加重，甚至造成絕收。

目前，人參病害的防治主要為化學防治，雖然見效快、效果好，但很容易造成農藥殘留、環境污染、生態平衡破壞及病菌抗藥性的產生，尤其是農藥殘留問題對我國人參產品質量影響很大，造成我國人參產量世界第一，但產值遠不及韓國的尷尬局面。因此，減少人參化學農藥的使用，尋找和開發能夠替代化學農藥的生物農藥是非常必要的，也是響應農業部提出的到2020年實現農藥化肥使用零增長的重要舉措。

人參的真菌性病害主要有根腐病、銹腐病、黑斑病等等。其中，根腐病對人參的危害尤為嚴重。人參根腐病由鐮孢菌(Fusarium sp.)引起，在人參園內發生較為普遍，可以導致根部腐爛，嚴重影響產量。目前中國主要采用化學藥劑進行防治，如代森錳鋅、烯唑醇、三唑酮等，生物防治除了有報道采用大作物使用的藥劑進行防治外，尚無商品化的人參專用生防制劑。長期施用化學農藥可以導致農殘超標，并易使病原菌產生抗藥性，導致防治效果下降。此外，長期、反復和大量使用化學農藥可引起土壤、水體和大氣的污染，同時也殺傷了其他有益微生物，破壞了生態平衡。因此，通過生物防治篩選對人參真菌性病害的高效菌株，同時篩選生防細菌對人參有防病促生作用的菌株迫在眉睫。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于針對現有技術中存在的問題提供貝萊斯芽孢桿菌及其應用，本發明提供的貝萊斯芽孢桿菌能夠防治人參根腐病、人參銹腐病、人參黑斑病，對人參根腐病的抑制作用為67.97％，人參黑斑病的抑制作用為68.41％，對人參銹腐病的相對防效達64.37％，同時對人參具有明顯的促生作用，且具有溶磷特性。

為實現本發明的目的本發明采用了如下技術方案。

本發明提供了一株菌株，貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)，其保藏編號為CGMCC No.20629。

本發明所述貝萊斯芽孢桿菌分離自吉林省長春市中國農業科學院特產研究所左家試驗基地的人參的根內部，命名為G1S3504，其分離方法為：

將處理后的人參根組織塊按每皿7塊均勻放置于含有NA的培養基上，每種組織重復30皿，放置于28℃恒溫培養箱中培養。分別于第2、5、7天觀察人參組織周圍新長出的菌落，挑取單一菌落進行分離純化，觀察純化后的菌株形態進行編號，并轉接至PDA斜面培養基置于28C°的恒溫培養箱中培養，通過平板對峙實驗篩選對人參根腐病、人參銹腐病、人參黑斑病致病菌具有明顯抑制作用的菌株，其命名為G1S3504。

G1S3504菌株的形態學特征：革蘭氏染色反應陽性，芽孢桿狀，單生或兩個串生，大小為0.8-(1.2)-1.3×2.3-(3.0)-4.2μm(見圖1)。在NA平板上，菌株的菌落呈不規則圓形，淡黃色，有褶皺，不透明，菌落邊緣常不整齊(見圖2)。

根據G1S3504結合16S rDNA序列(16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示)分析結果，鑒定G1S3504菌株為貝萊斯芽孢桿菌，該菌株在進行保藏時的分類名為芽孢桿菌Bacillussp。