[發明專利]篩分病菌模型的系統及篩分方法

在審

• 申請號: 202011395742.0
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112611864A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 沈克飛;許國洋;付利芝;閆志強;張素輝;楊柳;徐登峰
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/68;G16B5/00;G16B50/30
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發明屬于病菌篩分領域，具體涉及一種篩分感染化膿隱秘桿菌或感染偽結核棒狀桿菌模型的系統及方法。所述系統包括酶標板、加熱器、試劑、數據庫、酶標儀、數據對比輸出模塊；所述酶標板包括聚苯乙烯/聚氯乙烯材料標板，包括96孔或48孔；試劑包括抗原包被液、酶標抗體、顯色液、病菌感染模型或免疫模型血清；數據庫為健康或感染或免疫的動物模型產生不同的抗體量的吸光度，可導入和可刪除；所述酶標儀設置波長為450nm。本發明提供的篩分系統的數據庫完善，篩分的結果精確，可以快速篩分出感染病菌模型的病菌類型，簡單方便。

技術領域

本發明屬于病菌篩分領域，具體涉及一種篩分感染化膿隱秘桿菌或感染偽結核棒狀桿菌模型的系統及方法。

背景技術

化膿隱秘桿菌(Trueperella pyogenes)感染在全世界家養和野生動物中都有發生，感染通常導致多種動物的化膿性肺炎、乳腺炎、子宮內膜炎、流產、死胎等癥狀。化膿隱秘桿菌感染山羊主要有日漸消瘦、體表淋巴結炎、化膿性肺炎等臨床癥狀，剖解可見到肺臟等臟器有化膿灶，表現出肺泡隔增寬、肺泡壁增厚、肺纖維化以及多器官炎癥細胞的持續性浸潤、化膿性炎癥等病理變化。化膿隱秘桿菌是動物皮膚、上呼吸道和泌尿生殖道黏膜微生物群落的一部分，同時也是一種重要的機會致病菌，常與多種病原菌混合感染引發組織化膿性或壞死性病變。臨床上，從有體表淋巴結炎和呼吸道疾病癥狀的病患山羊肺臟中常分離到混合感染的化膿隱秘桿菌、偽結核棒狀桿菌(Corynebacteriumpseudotuberculosis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、奇異變形桿菌(Proteus mirabilis)等致病菌，在肺炎病例化膿隱秘桿菌的分離率中較高。

混合感染是現代規模化養殖中的常見現象，混合感染的化膿菌常為多重耐藥菌，這給藥物治療帶來了困難，需要確診才能采取更好有針對性的治療方案。混合感染同樣給臨床鑒別診斷帶來了極大困難，一般需要實驗室診斷才能確診。化膿菌混合感染的實驗室經典診斷方法是病原菌的分離鑒定，但化膿隱秘桿菌相對于偽結核棒狀桿菌、金黃色葡萄球菌、奇異變形桿菌等致病菌的生長周期更長、營養要求更高，通過分離培養往往會造成漏檢。重要的是，病原菌分離培養只適合于體表感染病例或剖檢病例的診斷。ELISA診斷是一種適合于活體檢測的常用方法，可以作為化膿菌感染這種慢性感染的感染狀態的依據。此外，研究化膿隱秘桿菌等化膿菌感染、免疫機理的動物常用小鼠，目前也缺乏確認小鼠感染、免疫狀態的篩分系統及方法。

傳統疫苗一般只對特定血清型病原體有良好免疫保護效果，不會對混合感染的病原體產生廣泛應答和較好交叉保護作用，這樣就需要針對每種病原體進行多次免疫接種才能取得較好的免疫預防效果。另外，混合感染中的一些病原體可能會影響另一些病原體感染或免疫的免疫應答水平，表現為免疫拮抗或協同。目前沒有相關文獻對混合感染的化膿隱秘桿菌、偽結核棒狀桿菌、金黃色葡萄球菌、奇異變形桿菌等致病菌的有效疫苗的說明。化膿隱秘桿菌已報道的抗原有溶血素(Pyolysin，PLO)和鐵ATP結合盒(ATP bindingcassette，ABC)轉運體的底物結合蛋白——鐵結合蛋白(Iron-binding protein，IBP)等，這些抗原為研究混合感染中化膿隱秘桿菌的抗體應答提供了明確靶標。

發明內容

本申請中小鼠感染或免疫化膿隱秘桿菌(生物保藏號為CCTCC NO：M2014037，GenBank NO：CP012649)會對偽結核棒狀桿菌感染產生交叉保護免疫。這為山羊化膿性感染的疫苗研發提供了新思路。

而且在研究化膿菌混合感染的抗體應答時，發現化膿隱秘桿菌與偽結核棒狀桿菌抗體存在交叉反應，IBP是化膿隱秘桿菌參與抗體應答、與偽結核棒狀桿菌發生血清學交叉反應的主要抗原之一。此外，在化膿隱秘桿菌免疫動物中，IBP的IgG抗體檢出率高于PLO抗體檢出率，提示IBP是評估化膿隱秘桿菌免疫水平的可選靶標。

有鑒于此，本發明在于提供一種篩分感染化膿隱秘桿菌或感染偽結核棒狀桿菌模型的系統。本發明中所述模型包括人工感染的動物模型和自然感染的動物模型。