[發明專利]重組人生長激素Fc融合蛋白和用途及其工程細胞株

在審

• 申請號: 202011394304.2
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112661858A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 徐婷;楊文靜;許文娟;黃偉;葉洪濤;崔智強;范清林;宋禮華
• 申請（專利權）人: 安徽安科生物工程（集團）股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/72;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;C12P21/02;A61K38/27;A61P5/06;A61P17/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京青松知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11384
• 代理人: 鄭青松

1.一種重組人生長激素Fc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由人生長激素、連接肽和Fc片段組成，所述融合蛋白由N端至C端依次為：人生長激素、連接肽、Fc片段，或者所述融合蛋白由N端至C端依次為Fc片段、連接肽、人生長激素。

2.一種根據權利要求1所述的重組人生長激素Fc融合蛋白，其特征在于，所述編碼人生長激素基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種根據權利要求1所述的重組人生長激素Fc融合蛋白，其特征在于，所述連接肽為柔性連接肽，所述柔性肽接頭氨基酸組成的結構通式為(GGGGS)nA，其中n是大于或等于2的整數。

4.一種根據權利要求1所述的重組人生長激素Fc融合蛋白，其特征在于，所述Fc片段為人IgG Fc變體。

5.一種根據權利要求4所述的重組人生長激素Fc融合蛋白，其特征在于，所述的人IgGFc變體選自以下一組或多組：

1)至少含有以下兩個突變的IgG1 Fc：Leu234Ala，Leu235Ala，Asn297Ala，Val308Pro以及刪除C末端Lys，所述IgG1 Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，氨基酸序列如SEQ IDNO：4所示；

2)至少含有以下兩個突變的IgG2 Fc：Asn297Ala，Val308Pro，Pro331Ser以及刪除C末端Lys，所述IgG2 Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；

3)至少含有以下兩個突變的IgG4 Fc：至少含有Ser228Pro，Glu233Pro，Leu234Ala或者Leu234Val，Leu235Ala，Asn297Ala，Val308Pro和Arg409Lys以及刪除C末端Lys的人IgG4絞鏈區、CH2和CH3區域，所述IgG4 Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，氨基酸序列如SEQ IDNO：8所示。

6.一種多核苷酸，其特征在于，編碼權利要求1-5任一權利要求所述的重組人生長激素Fc融合蛋白的氨基酸。

7.一種載體或載體組，其特征在于，包含權利要求6所述的多核苷酸。

8.一種宿主細胞，其特征在于，包含權利要求7所述的載體或載體組，所述宿主細胞是原核的或真核的，為酵母細胞、哺乳動物細胞或適用于制備抗體或其抗原結合片段的其它細胞中的一種或多種。

9.一種表達權利要求1至5任一項所述融合蛋白的陽性克隆及亞克隆的篩選方法，其特征在于，通過逐漸提高氨甲喋呤(amethopterin,MTX)濃度，從96板→24孔板→6孔板→25cm²培養瓶→125ml搖瓶，采用ELISA法逐步篩選出細胞株，將最終篩選細胞株命名為rhGH-Fc/Fc-rGH細胞株，表達的目的蛋白為rhGH-Fc/Fc-rGH重組蛋白。

10.一種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-5任意一項所述的重組人生長激素Fc融合蛋白，或包含權利要求7所述的載體或載體組，以及藥學上可接受的載體。

11.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權利要求1-5中任意一項所述的重組人生長激素Fc融合蛋白或如權利要求10所述的藥物組合物。

12.一種生產重組人生長激素Fc融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括在表達所述多核苷酸的條件下培養如權利要求8所述的宿主細胞。

13.一種根據權利要求1-5任一項所述的重組人生長激素Fc融合蛋白的用途，其特征在于，所述融合蛋白誘導延長的IGF-1反應。