[發(fā)明專利]一種高效液相檢測(cè)Fmoc-AEEA含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011389963.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN112578044B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅前東;舒娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都普康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 成都時(shí)譽(yù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51250
• 代理人: 汪林

本發(fā)明公開一種高效液相檢測(cè)Fmoc?AEEA含量的方法，具體色譜條件為，色譜柱為Agilent ZORBAX SB?C18，檢測(cè)波長為210?220nm，柱溫為25℃；流動(dòng)相A為0.1%TFA水；流動(dòng)相B為0.1%TFA乙腈，流動(dòng)相流速為0.8?1.2ml/min。本發(fā)明方法測(cè)定主成分Fmoc?AEEA的含量，具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種一種高效液相檢測(cè) Fmoc-AEEA含量的方法。

背景技術(shù)

[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

；簡稱Fmoc-AEEA。

由于工藝原因，產(chǎn)物中通常包括Fmoc-β-Ala-AEEA 、AEEA、Fmoc-AEEA-AEEA和Fmoc-β-Ala等雜質(zhì)，現(xiàn)有技術(shù)中，并無一種檢測(cè)方法，以同時(shí)區(qū)分主成分Fmoc-AEEA和上述雜質(zhì)，而從準(zhǔn)確測(cè)定主成分Fmoc-AEEA的含量。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明公開一種高效液相檢測(cè) Fmoc-AEEA含量的方法，其中包含的雜質(zhì)為Fmoc-β-Ala-AEEA 、AEEA、Fmoc-AEEA-AEEA和Fmoc-β-Ala，本發(fā)明中，主成分的色譜峰與上述各雜質(zhì)的色譜峰成功區(qū)分，從而準(zhǔn)確測(cè)定處主成分Fmoc-AEEA的含量。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種高效液相檢測(cè) Fmoc-AEEA含量的方法，待測(cè)樣品中主成分為Fmoc-AEEA，待測(cè)樣品中還包括以下雜質(zhì)：Fmoc-β-Ala-AEEA 、AEEA、Fmoc-AEEA-AEEA和Fmoc-β-Ala；采用外標(biāo)法來檢測(cè)主成分Fmoc-AEEA的含量；具體檢測(cè)方法具體如下：

（1）色譜條件：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，檢測(cè)波長為210-220nm，柱溫為25℃；流動(dòng)相A為0.1%TFA水；流動(dòng)相B為0.1%TFA乙腈，流動(dòng)相流速為0.8-1.2ml/min；

洗脫程序?yàn)椋?-20min內(nèi)，流動(dòng)相A由70%降至0，流動(dòng)相B由30%升至100%；在20-25min內(nèi)，保持流動(dòng)相A為0，流動(dòng)相B為100%；在25-27min內(nèi)，流動(dòng)相A由0升至70%，流動(dòng)相B由100%降至30%；在27-35min內(nèi)，保持流動(dòng)相A為70%，流動(dòng)相B為30%；

（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以乙腈為溶劑，將Fmoc-AEEA標(biāo)準(zhǔn)品配置成不同濃度的試樣，將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品試樣按照進(jìn)行步驟（1）中的分析方法進(jìn)行檢測(cè)，得到不同濃度的主產(chǎn)品Fmoc-AEEA的峰對(duì)應(yīng)的峰面積，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（3）配制待測(cè)樣品溶液：以乙腈作為溶劑，將待測(cè)樣品溶于乙腈中；

（4）將步驟（3）所得的待測(cè)樣品溶液，按照步驟（1）中的分析方法進(jìn)行檢測(cè)，得到主產(chǎn)品Fmoc-AEEA的峰的峰面積，再將所得峰面積代入步驟（2）所得標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到待測(cè)樣品中主產(chǎn)品Fmoc-AEEA的含量。

進(jìn)一步的，步驟（3）中，待測(cè)樣品配制濃度為0.8-1.2mg/mL。

進(jìn)一步的，進(jìn)樣量為5μL。

進(jìn)一步的，檢測(cè)波長為220nm。

進(jìn)一步的，流動(dòng)相的流速為1mL/min。

本發(fā)明還提供一種高效液相檢測(cè) Fmoc-AEEA中有關(guān)物質(zhì)含量的方法，所述有關(guān)物質(zhì)包括Fmoc-β-Ala-AEEA 、AEEA、Fmoc-AEEA-AEEA和Fmoc-β-Ala，采用主成分自身對(duì)照法來檢測(cè)各有關(guān)物質(zhì)的含量；具體色譜條件：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，檢測(cè)波長為210-220nm，柱溫為25℃；流動(dòng)相A為0.1%TFA水；流動(dòng)相B為0.1%TFA乙腈，流動(dòng)相流速為0.8-1.2ml/min；