[發明專利]一種多能干細胞培養基

在審

• 申請號: 202011389233.7
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112458042A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 陳曉棟;尚倩雯;賈善粉;張勝超;王旻賢;馬慧
• 申請（專利權）人: 無錫華泰創新藥技術研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/0735
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種多能干細胞培養基，屬于生物工程技術領域，包括基礎培養基和以下添加組分；150－200μL/cm2的康寧BD基質膠、10?20ng/mL亞硒酸鈉、20～200ng/mL重組轉鐵蛋白、20?30μg/mL胰島素、400?600μg/mL大蒜素和40?60μg/mL鏈霉素，通過設有康寧BD基質膠，Matrigel聚合形成具有生物學活性的三維基質，模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養和分化；通過重組轉鐵蛋白、胰島素等的作用下能夠保證細胞的正常增殖，且降低了病原體污染的可能性；通過大蒜素和鏈霉素的聯合使用可顯著增加大蒜素對細菌的抑制和滅殺作用，使得本發明中的細胞培養基對細菌具有良好抑制和滅殺作用，從而利于細胞的生長和增殖，減少細胞培養基中細菌感染的可能性。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體是一種多能干細胞培養基。

背景技術

多能干細胞(Pluripotency stem cell，PSC)是一類具有自我更新、自我復制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種APSC多能細胞，多能干細胞(Ps)具有分化出多種細胞組織的潛能。人的iPSC培養過程經歷了使用飼養層細胞培養、無飼養層細胞培養以及無動物源性無飼養層細胞培養的三個階段。飼養層細胞通常來源于小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)，其批間差、動物源性、各類感染源性、成分不確定性等影響實驗研究的判斷和進一步深入地應用研究。

應用iPS細胞來治療疾病是人們的最終目標。iPS細胞不僅可用于分化和移植，還可以提供體外的疾病模型，以便于研究疾病形成的機制、篩選新藥以及開發新的治療方法。人類iPS細胞的建立被公認為2007年最重要的科技進展之一,這項技術不僅可以從體細胞建立個體特異的多能干細胞系,解決了細胞移植治療中的免疫排斥問題,而且為研究人類細胞的重編程的機理以及研究個體特異的疾病發生機理提供了有力的方法。在干細胞研究領域,iPS細胞技術的出現無疑是具有里程碑意義的突破,多種體細胞經過體外培養和誘導均可轉變成為具有多向分化潛能的干細胞,并且證明了幾種已知的轉錄因子可以使已分化的體細胞逆轉為未分化的狀態,表明細胞的巨大可塑性。

傳統的多能干細胞培養基存在一定的缺陷，在細胞培養基培養的過程中的細胞易受到外界的細菌感染，細菌會影響細胞的生長，不利于細胞的培養。

發明內容

本發明的目的在于提供一種多能干細胞培養基，所述多能干細胞培養基包括基礎培養基和以下添加組分，所述添加組分包括有400-600μg/mL大蒜素和40-60μg/mL鏈霉素，通過大蒜素和鏈霉素的聯合使用對細菌具有抑制細菌的存活，從而具有良好的殺菌作用，則利于細胞培養基中細胞的培養，解決了上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明提供了一種多能干細胞培養基，包括基礎培養基和以下添加組分；150－200μL/cm2的康寧BD基質膠、10-20ng/mL亞硒酸鈉、20～200ng/mL重組轉鐵蛋白、20-30μg/mL胰島素、400-600μg/mL大蒜素和40-60μg/mL鏈霉素。

優選地，所述添加組分還包括葡萄糖。

優選地，所述葡萄糖的濃度為10-20mmol/L。

優選地，所述添加組分還包括維生素C。

優選地，所述維生素C的濃度為6～10μg/mL。

優選地，所述添加組分還包括堿性成纖維細胞生長因子和轉化生長因子beta1。

優選地，所述堿性成纖維細胞生長因子的濃度為10-30ng/mL，所述轉化生長因子beta1的濃度為1-2ng/mL。

優選地，所述基礎培養基為DMEM/F12細胞培養基。

優選地，所述DMEM/F12細胞培養基的滲透壓為270～330mosmol/L。