[發(fā)明專利]與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖的Indel分子標(biāo)記gyIndel3及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112760396B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王敏;彭慶務(wù);何曉明;劉文睿;江彪;謝大森;林毓娥;梁肇均;陳林;閆晉強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

本發(fā)明公開了一種與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖的Indel分子標(biāo)記gyIndel3、引物及其在節(jié)瓜全雌性育種方面的應(yīng)用。本發(fā)明中的Indel標(biāo)記變異穩(wěn)定，檢測簡易清晰，無需酶切，成本較低，有助于全雌性狀的選育效率，加速了節(jié)瓜雌性系的選育過程；本發(fā)明的標(biāo)記與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖，為全雌基因的克隆和分子機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)，加快了節(jié)瓜雌性系的分子輔助育種進(jìn)程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖的Indel 分子標(biāo)記gyIndel3及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

節(jié)瓜(Benincasa hispida Cogn.var.Chieh-qua How)又名毛瓜、毛節(jié)瓜，是葫蘆科冬瓜屬冬瓜種的變種，肉質(zhì)柔滑，味微甜清香、甘爽，富含維生素、丙醇二酸等營養(yǎng)成分，是華南地區(qū)出口的主要蔬菜作物(He et al.,2007)。

節(jié)瓜性型表現(xiàn)豐富，有全雌株、強(qiáng)雌株、雌雄同株等多種類型，雌花出現(xiàn)早、節(jié)位低、數(shù)量多、分布均，是節(jié)瓜早熟、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的基礎(chǔ)(Robinson, 2000；He et al.,2007)。目前節(jié)瓜在生產(chǎn)上大多利用全雌性或強(qiáng)雌性進(jìn)行優(yōu)勢育種。但由于性別表現(xiàn)復(fù)雜，節(jié)瓜遺傳基礎(chǔ)較為狹窄，國內(nèi)外鮮有報道節(jié)瓜性別決定的遺傳研究。即使利用同源克隆方法分離節(jié)瓜全雌基因，但因遺傳規(guī)律不清晰和不同材料間的背景差異，導(dǎo)致研究結(jié)果無法運用到實際育種中。因此，對節(jié)瓜全雌性進(jìn)行遺傳研究有助于提高雌性系的選育效率，加快分子育種進(jìn)程。

研究者已經(jīng)從甜瓜和黃瓜中分離出控制植株全雌性的隱性基因WIP1 (Martin etal.,2009；Boualem et al.,2015)，開發(fā)出實用性的分子標(biāo)記，且已闡明全雌性的分子調(diào)控機(jī)理。但是，關(guān)于節(jié)瓜性型的研究主要集中在生理學(xué)研究和初步遺傳規(guī)律方面，分子機(jī)理研究方面鮮有報道。另外，由于節(jié)瓜的遺傳基礎(chǔ)較為狹窄，性別決定相關(guān)基因尚未克隆，尚未獲得與其緊密連鎖的Indel分子標(biāo)記，極大限制了節(jié)瓜性別決定的遺傳研究進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的在于提供一種與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖的Indel分子標(biāo)記gyIndel3及用于擴(kuò)增該分子標(biāo)記gyIndel3的引物。

本發(fā)明的另一個目的在于提供上述分子標(biāo)記gyIndel3在節(jié)瓜全雌性育種方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述第一個目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：與節(jié)瓜全雌性狀緊密連鎖的Indel分子標(biāo)記gyIndel3，該分子標(biāo)記gyIndel3的序列如SEQ ID NO.1所示。

該標(biāo)記gyIndel3位于節(jié)瓜第8號染色體上，大小為191bp。

該標(biāo)記與節(jié)瓜全雌性性狀密切相關(guān)，可為后續(xù)全雌基因的克隆與分子機(jī)制研究，以及節(jié)瓜雌性材料的創(chuàng)制提供基礎(chǔ)，顯著提高雌性系的定向選擇效率。

本發(fā)明還提供了用于PCR擴(kuò)增上述Indel分子標(biāo)記gyIndel3的引物，所述引物包括正向引物gyIndel3-F和反向引物gyIndel3-R，其中正向引物gyIndel3-F 的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物gyIndel3-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

具體的：

正向引物(gyIndel3-F)為5’-TGGCAATTGTAGTGCCAATATATG-3’；

反向引物(gyIndel3-R)為5’-GCTAAGCTTGTCAGCGATAGA-3’。

獲得上述Indel分子標(biāo)記的過程如下：

(1)以全雌性節(jié)瓜A36為母本，弱雌節(jié)瓜SX為父本，構(gòu)建F1、F2群體；

(2)采用改良的CTAB方法對節(jié)瓜親本、F1和F2群體進(jìn)行DNA提??；