[發明專利]一種快速檢測旋毛蟲肌幼蟲的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011385689.6
• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112525885A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 王學林;劉明遠;唐斌;劉曉雷;丁靜;李健;王洋;白雪;楊勇
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

本發明提供一種快速檢測旋毛蟲肌幼蟲的檢測試劑盒，屬于光譜學和生物領域。包括銀溶膠、石英片和拉曼光譜儀，采用鹽酸羥胺絡合法制備銀溶膠，將待測樣品和制備的銀溶膠以一定比例混合均勻后，滴于石英片上，待烘干后，使用confocal Raman microspectrometer激光共聚焦拉曼光譜儀檢測。所獲得的拉曼光譜通過主成分分析和線性判別分析，實現對旋毛蟲肌幼蟲感染的定性檢測。優點是檢測試劑盒操作簡單、耗時短、需要樣品量小，特異性和靈敏度高，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于光譜學和生物領域，特別涉及一種快速檢測旋毛蟲肌幼蟲的檢測試劑盒。

背景技術

旋毛蟲是一種線蟲，可寄生于多種動物體內，包括人和多種哺乳動物，是重要的人獸共患寄生蟲病的病原。目前，人生食或半生食肉類感染旋毛蟲的事件時有發生，嚴重威脅公共衛生安全，同時，也會影響正常的肉類進出口貿易，造成經濟損失。旋毛蟲目前是生豬屠宰檢驗中強制檢驗項目。

目前對于屠宰動物旋毛蟲病的檢驗，國際通用方法為鏡檢法和集樣消化法。然而以上兩方法均存在一定的弊端，鏡檢法費時費力而且敏感性差，其敏感性為每克待檢肉樣中含3條蟲體時方可檢出。集樣消化法雖可大大提高檢出率，將蟲體檢出率提高至每克肉樣中1條蟲體，但該方法仍十分繁瑣，因為集樣消化法以20頭份為一組份，在發現陽性樣品時仍需對陽性組采用鏡檢法進行逐頭鏡檢。從敏感性的角度來看，由鏡檢法和集樣消化法所造成漏檢的肉類均存在安全隱患并可引起人類的感染。同時，這兩種方法無法應用于活豬的旋毛蟲檢測。免疫學方法如ELISA是目前最為敏感的方法，其敏感性可達每克肉樣中0.01條蟲體，但由于目前所廣泛選用的檢測抗原主要來源于蟲體(如ES抗原和蟲體粗抗原等)，存在組分復雜、不利于大規模生產、制備過程繁瑣等弊端，此外，還存在嚴重的交叉反應，因此免疫學方法始終未被納入法規方法。因此亟需建立一種操作簡單、快速、靈敏、無損的旋毛蟲檢測方法。

表面增強拉曼光譜散射(Surface Enhanced Raman Scattering,SERS)是指當某些分子吸附到具有納米級的貴金屬粒子表面時，得到的拉曼散射信號就會增強上百萬倍，由此得到的光譜被稱為“表面增強拉曼光譜”。采用SERS技術，可以利用少量血清，即可得到整體血清變化情況，從而可以實現活體檢測，不會影響后續貿易。另外，由于SERS具有“分子指紋”的特征，可以很好的反映細微的變化，實現旋毛蟲肌幼蟲的檢測。因此非常適合于生物領域的研究。

發明內容

本發明提供一種快速檢測旋毛蟲肌幼蟲的檢測試劑盒，以解決現有的檢測技術費時費力、且需要配備專業技術人員的問題。

本發明采取的技術方案是：包括銀溶膠、石英片和拉曼光譜儀，其中：

所述銀溶膠的制備方法如下：常溫下將9mL0.1M氫氧化鈉溶液加入到10mL6×10^-2M鹽酸羥胺溶液中，混勻后，快速加入到180mL 1.11×10^-3M硝酸銀水溶液中，攪拌至均勻，生成灰白色溶膠，10000rpm 10min離心，棄去上清，取下層溶膠；

所述的石英片為波數范圍300-1500cm^-1內無明顯拉曼峰的基底石英片；

所述的石英片亦可由玻璃片代替；

所述的拉曼光譜儀為confocal Raman microspectrometer激光共聚焦拉曼光譜儀。

所述的拉曼光譜儀檢測條件為：激光波長785nm，收集30s，累積2次，波數范圍是300-1500cm^-1。

應用上述試劑盒進行旋毛蟲肌幼蟲檢測的方法，包括以下步驟：

1)將待測樣品與銀溶膠以1:1的比例混合均勻；

2)將步驟1)混勻后的樣品在4℃孵育1.5-2h；