[發明專利]一種篩選雙孢蘑菇A15菌株耐高溫菌株的引物及方法在審
| 申請號： | 202011383764.5 | 申請日： | 2020-12-01 |
| 公開（公告）號： | CN112280891A | 公開（公告）日： | 2021-01-29 |
| 發明（設計）人： | 陳輝;張津京;黃建春;王倩;陳明杰 | 申請（專利權）人： | 上海市農業科學院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王華 |
| 地址： | 200000 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 篩選 蘑菇 a15 菌株 耐高溫 引物 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種篩選雙孢蘑菇A15菌株耐高溫菌株的引物，其特征在于：所述引物的序列為：
9486-2F2：AACTAACTAACACACCAA；
9486-2R2：TTGGTGTGTTAGTTAGTT。
2.一種篩選雙孢蘑菇A15菌株耐高溫菌株的方法，其特征在于：包括下列步驟：
步驟1：提取A15菌株DNA
將待檢測的雙孢蘑菇A15菌株在PDA平板上進行培養，然后挑取菌絲，用DNA裂解液對挑取的菌絲進行裂解，得到菌絲裂解液；
步驟2：PCR擴增
以菌絲裂解液作為PCR擴增的模板，使用權利要求1所述的引物9486-2F2和9486-2R2進行PCR擴增；
步驟3：如果可以擴增出產物大小為388bp的條帶，則其為耐高溫菌株，反之則為不耐高溫菌株。
3.根據權利要求2所述的篩選雙孢蘑菇A15菌株耐高溫菌株的方法，其特征在于：PCR擴增程序為：94℃預變性5min，95℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環，72℃，10min，4℃保存。
4.根據權利要求2所述的篩選雙孢蘑菇A15菌株耐高溫菌株的方法，其特征在于：PCR擴增體系為：總體積為20μl，包括10μl 的PCR mix，7ul的雙蒸水，1ul的引物9486-2F2，1ul的引物9486-2R2和1ul的菌絲裂解液。
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