[發(fā)明專利]華支睪吸蟲的檢測(cè)引物、檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011380966.4
• 申請(qǐng)日: 2020-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN112322754A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉曉雷;劉明遠(yuǎn);楊勇;唐斌;丁靜;張春玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種華支睪吸蟲的檢測(cè)引物，其特征在于，所述檢測(cè)引物為COX-F引物和COX-R引物；所述COX-F引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述COX-R引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一種華支睪吸蟲的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒包括權(quán)利要求1所述檢測(cè)引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒還包括反應(yīng)液、陰性質(zhì)制品和陽(yáng)性質(zhì)制品；所述陰性質(zhì)制品是水；所述陽(yáng)性質(zhì)制品中含有華支睪吸蟲DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)液包括：Primer Freerehydration buffer和280mM的MgAc溶液；所述陽(yáng)性質(zhì)制品中含有華支睪吸蟲DNA濃度為94ng/μL。

5.一種華支睪吸蟲的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的檢測(cè)方法具體步驟包括：

(1)提取待檢測(cè)樣品的DNA；

(2)然后利用權(quán)利要求1所述檢測(cè)引物或權(quán)利要求2-4任意一項(xiàng)所述檢測(cè)試劑盒對(duì)步驟(1)獲得的檢測(cè)樣品的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；

(3)純化步驟(2)獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物，檢測(cè)到228bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，即可判斷待檢測(cè)樣品含有華支睪吸蟲。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)體系包括：濃度為10μmol/L的COX-F、濃度為10μmol/L的COX-R、280mM的MgAc溶液、待檢測(cè)樣品DNA、ddH₂O和Primer Free rehydration buffer。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)條件是20～40℃等溫反應(yīng)5～25min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)所述檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的方法是向擴(kuò)增產(chǎn)物中加入Sybr Green I染料，在紫外燈下照射觀察顏色，紫外燈下發(fā)出黃綠色熒光，顯示結(jié)果為陽(yáng)性，若發(fā)出橘色熒光，顯示結(jié)果為陰性。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)總體系為50μL包括Primer Free rehydration buffer 29.5μL、COX-F 2μL、COX-R 2μL、待檢測(cè)樣品DNA 1μL、ddH₂O 13μL和MgAc溶液2.5μL。

10.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)引物或權(quán)利要求2-4任意一項(xiàng)所述的檢測(cè)試劑盒在制備感染華支睪吸蟲診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用。