[發明專利]中煙103的DNA指紋圖譜及其應用有效
| 申請號： | 202011374226.X | 申請日： | 2020-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN112481403B | 公開（公告）日： | 2022-10-14 |
| 發明（設計）人： | 劉楠;張威;何聲寶;王英元;羅安娜;馮曉民;張曉慧;范月月 | 申請（專利權）人： | 國家煙草質量監督檢驗中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382 | 代理人： | 張偉 |
| 地址： | 450001 河南省鄭州市*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 103 dna 指紋 圖譜 及其 應用 | ||
1.中煙103的DNA指紋圖譜在鑒定中煙103中的應用，所述DNA指紋圖譜包括101個SNP位點，所述SNP位點及該處的特異性核苷酸如下：
。
2.中煙103的鑒定方法，所述鑒定方法包括以下步驟：
檢測待測煙草的基因組DNA中101個SNP位點處的核苷酸，并與中煙103的DNA指紋圖譜中對應的101個SNP位點處的特異性核苷酸相比較，符合率≥95%時將待測煙草鑒定為中煙103，其中所述101個SNP位點以及中煙103的DNA指紋圖譜中對應的101個SNP位點處的特異性核苷酸如下：
。
3.根據權利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，從待測煙草的新鮮煙葉中獲得所述基因組DNA。
4.根據權利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，所述鑒定方法包括以下步驟：
(1)從待測煙草的組織樣品中提取基因組DNA，以限制性內切酶SacI和MseI對基因組DNA進行酶切；
(2)將步驟(1)得到的酶切片段與測序接頭相連接后純化，選擇長度在320-420bp范圍內的片段，富集擴增并測序，其中采用Illumina NovaSeq測序系統，原始測序讀長為Paired-end 150bp，測序數據為FASTQ格式；
(3)將步驟(2)得到的對應于權利要求2中101個SNP位點處的核苷酸與權利要求2中限定的中煙103的DNA指紋圖譜中對應的101個SNP位點處的特異性核苷酸相比較，符合率≥95%時將待測煙草鑒定為中煙103。
5.根據權利要求4所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述組織樣品為新鮮煙葉。
6.根據權利要求4所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，酶切體系為：
試劑 用量
DNA，≥40ng/μl 20μl
MseⅠ，10000U/ml 0.15μl
SacⅠ，10000U/ml 0.15μl
10* 緩沖液 3μl
水 加至30μl
總體積 30μl
37℃溫育4h以上。
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