[發(fā)明專利]一種鎘離子微生物全細(xì)胞生物傳感-吸附器的構(gòu)建及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011373767.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN112481177B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭妍;張乃興;惠長(zhǎng)野;鄭紅菊;陳閩鵬;李麗梅;陳鈺婷;劉征宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市職業(yè)病防治院
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/65;G01N21/64;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.微生物，含有CadR基因、lpp-ompA-CdBD基因、熒光蛋白編碼基因與驅(qū)動(dòng)所述CadR基因、所述lpp-ompA-CdBD基因與所述熒光蛋白編碼基因表達(dá)的啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子的活性由CadR蛋白質(zhì)與鎘的復(fù)合物激活；

所述CadR基因編碼如下A1)、A2)或A3)的CadR蛋白質(zhì)：

A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白質(zhì)；

A2)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；

A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端連接蛋白質(zhì)標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；

所述lpp-ompA-CdBD基因編碼如下B1)、B2)或B3)的lpp-ompA-CdBD蛋白質(zhì)：

B1)氨基酸序列是序列表中序列4的蛋白質(zhì)；

B2)將序列表中序列4所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；

B3)在B1)或B2)的N末端或/和C末端連接蛋白質(zhì)標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其特征在于：所述CadR基因?yàn)槿缦耡1)或a2)或a3)：

a1)序列表中序列3所示的DNA分子；

a2)與a1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述CadR蛋白質(zhì)的DNA分子；

a3)在嚴(yán)格條件下與a1)或a2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述CadR蛋白質(zhì)的DNA分子；

和/或，所述lpp-ompA-CdBD基因?yàn)槿缦耣1)或b2)或b3)：

b1)序列表中序列1的第577-1266位所示的DNA分子；

b2)與b1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述lpp-ompA-CdBD蛋白質(zhì)的DNA分子；

b3)在嚴(yán)格條件下與b1)或b2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述lpp-ompA-CdBD蛋白質(zhì)的DNA分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的微生物，其特征在于：所述啟動(dòng)子為雙向啟動(dòng)子；

進(jìn)一步，所述啟動(dòng)子含有序列1的第506-534位。

4.微生物，含有由權(quán)利要求1-3中任一所述CadR基因、所述lpp-ompA-CdBD基因、所述熒光蛋白編碼基因與所述啟動(dòng)子連接得到的DNA分子，所述啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)所述CadR基因、所述lpp-ompA-CdBD基因、所述熒光蛋白編碼基因的表達(dá)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微生物，其特征在于：所述DNA分子還含有核糖體結(jié)合位點(diǎn)和/或終止子。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的微生物，其特征在于：所述DNA分子為如下c1)或c2)或c3)：

c1)序列表中序列1所示的DNA分子；

c2)與c1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有相同功能的DNA分子；

c3)在嚴(yán)格條件下與c1)或c2)限定的核苷酸序列雜交，且具有相同功能的DNA分子。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的微生物，其特征在于：所述DNA分子通過含有所述DNA分子的重組載體處于所述微生物中。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的微生物，其特征在于：所述微生物為細(xì)菌、酵母、藻或真菌。

9.下述任一產(chǎn)品：

X1、由權(quán)利要求1-3中任一所述CadR基因、所述lpp-ompA-CdBD基因、所述熒光蛋白編碼基因與所述啟動(dòng)子組成的成套產(chǎn)品；

X2、權(quán)利要求4-6中任一所述的DNA分子；

X3、權(quán)利要求7所述的重組載體。

10.下述任一應(yīng)用：

Y1、權(quán)利要求1-8所述的微生物在指示和/或富集鎘中的應(yīng)用；

Y2、權(quán)利要求1-8所述的微生物在制備指示和/或富集鎘產(chǎn)品中的應(yīng)用；

Y3、權(quán)利要求9所述產(chǎn)品在指示和/或富集鎘中的應(yīng)用；

Y4、權(quán)利要求9所述產(chǎn)品在制備指示和/或富集鎘產(chǎn)品中的應(yīng)用。