[發明專利]一種外泌體純化的裝置及應用

在審

• 申請號: 202011373189.0
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN114574355A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 張麗華;李一嵐;袁輝明;戴忠鵬;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12M1/42
• 分類號: C12M1/42;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/12;C12M1/04;C12M1/02;C12M1/00;B01D61/58;B01D61/18
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種外泌體純化的裝置，包括：(一)預過濾部分，(二)外泌體純化部分；

所述預過濾部分包括超濾杯(02)，超濾杯為一密閉容器，于超濾杯中部橫向設置有濾膜(03)，濾膜的四周邊緣與超濾杯內壁面密閉連接，濾膜將超濾杯分隔成上下二個互不連通的腔室；于超濾杯內的上部腔室的上部設有氣體接口，氣體接口通過管路與氣源相連(01)；

外泌體純化部分包括樣品儲存容器(05)、蠕動泵(06)、滲透池；

滲透池為一密閉容器，于滲透池內的中部橫向設置有濾膜，濾膜的四周邊緣與滲透池內壁面密閉連接，濾膜將滲透池分隔成上下二個互不連通的腔室；于滲透池頂部和底部分別設置有一板狀電極，二板狀電極相互平行、間隔、相對設置；二板狀電極通過導線與外部電源相連；

超濾杯(02)的下部腔室通過管路與樣品儲存容器(05)相連；蠕動泵(06)的入口通過管路與樣品儲存容器(05)相連通，蠕動泵(06)的出口通過管路與滲透池內的上部腔室相連通；滲透池內的待收集物所在腔室(可為上部腔室或下部腔室)設有物料出口，物料出口通過管路與樣品儲存容器相連通，滲透池內的無待收集物的腔室(可為下部腔室或上部腔室)通過管路與廢液(19)收集瓶相連。

2.按照權利要求1所述的裝置，其特征在于：

超濾杯(02)置于一磁力攪拌器(04)上，于超濾杯(02)內的腔室內放置有攪拌子，由攪拌器帶動攪拌子運動；于上部腔室的頂部設有液體物料加料口，于加料口上設有一用于開啟和密閉加料口的密封蓋。

3.按照權利要求1所述的裝置，其特征在于：于濾膜下方設有用于支撐濾膜的篩板。

4.按照權利要求1所述的裝置，其特征在于：所述滲透池為2-4個依次通過管路串連而成的滲透池組，與蠕動泵的出口相連的為第一級滲透池(07)，與樣品儲存容器(05)相連的為最后一級滲透池(13)；

即上一級滲透池的待收集物所在腔室通過管路與下一級滲透池的上部腔室通過管路相連通，最后一級待收集物所在腔室通過管路與樣品儲存容器相連通；

滲透池的無待收集物的腔室通過管路與廢液收集瓶相連。

5.按照權利要求1或4所述的裝置，其特征在于：于滲透池的待收集物所在腔室出口的物料出口處設有閥門，或設有閥門和壓力表。

6.按照權利要求1所述的裝置，其特征在于：所述濾膜為無機氧化鋁，聚碳酸酯，聚四氟乙烯或纖維素膜中的一種或二種以上；

滲透池上的分別二個板狀電極通過導線與外部直流電源相連，于滲透池內的形成垂直濾膜的電場；于二個板狀電極之間設有電壓測量裝置。

7.一種權利要求1-6任一所述裝置的應用，其特征在于：用于液體中外泌體的富集；

1)預過濾部分用于實現樣品中尺寸大于外泌體的污染顆粒物的去除；外泌體純化部分用于實現樣品中污染物的去除進而實現外泌體的純化；

預過濾部分中的超濾杯上部有外接氮氣(01)；將孔徑為200-400nm濾膜(03)橫向夾在超濾杯中部，超濾杯(02)放在攪拌器(04)上，在超濾杯上部濾膜上方放入待處理液體樣品，通過超濾杯上的氮氣流(01)形成的壓力實現樣品在膜上到膜下的過濾，過濾的樣品等待外泌體純化部分處理；預過濾部分通過調節接口引入的氮氣壓力為0.1-15MPa；

2)所述的外泌體純化部分：滲透池中濾膜孔徑尺寸為10-300nm；

預過濾的樣品由泵控制部分的蠕動泵(06)的流速的調節使樣品在200μL/min～200mL/min的速度通過管路進入到滲透池的膜上；調節滲透池后串聯連接的壓力控制部分的閥門實現整個滲透池內的壓力為0.002-0.2MPa，滲透池上下兩部分的流速比例在1:0～0:1之間；

同時可選擇性的調節加在滲透池兩側的電壓在0-100V之間；

樣品在整個裝置的純化部分進行反復的過濾之后，于樣品儲存容器加入磷酸鹽緩沖液(PBS)進行體系中膜的清洗，最終于樣品儲存容器收集獲得外泌體。