[發(fā)明專利]調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生LMO3基因及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011371861.2
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112458095A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 康悅;姜大慶
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/6881;A61K38/17;A61K31/713;A61L27/38;A61P19/08
• 代理公司: 沈陽東大知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21109
• 代理人: 寧佳

本發(fā)明的調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生LMO3基因及其應(yīng)用，具體為LMO3基因，其Gene ID為hsa?55885，LMO3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。該基因具體應(yīng)用于相應(yīng)的控ADSCs成骨分化及組織再生產(chǎn)品、再生調(diào)控等方面。本發(fā)明通過LMO3調(diào)控ADSCs成骨分化和組織再生的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了LMO3在脂肪干細(xì)胞成骨分化和/組織再生過程中均起了重要的調(diào)控作用；LMO3可作為組織再生治療的潛在靶點(diǎn)，推動開發(fā)出新的關(guān)于LMO3相關(guān)藥物或因子，并最終將其運(yùn)用到再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，達(dá)到臨床上真正的精準(zhǔn)醫(yī)療。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于骨組織再生技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生LMO3基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

創(chuàng)傷修復(fù)與重建包括皮膚或軟組織損傷所致創(chuàng)傷的修復(fù)、慢性難治性傷口的愈合、骨創(chuàng)傷的修復(fù)、血管生成、脊髓的修復(fù)等內(nèi)容。傳統(tǒng)的自體移植造成供者組織醫(yī)源性缺損，嚴(yán)重影響患者的愈合和生活質(zhì)量。同種異體移植的應(yīng)用也受到免疫排斥和感染的限制。因此，迫切需要一種新的治療策略，以限制繼發(fā)性創(chuàng)傷、低免疫原性和理想的功能恢復(fù)。脂肪干細(xì)胞(adipose Derived Stem Cells，ADSCs)最近幾年引起了廣泛的關(guān)注。脂肪干細(xì)胞來源廣泛、含量較多、獲取方式簡單、患者承受的痛苦也較少。在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，脂肪干細(xì)胞可以分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞以及肌細(xì)胞等。ADSCs具有多向分化能力和較明確的成骨潛能，因此成為骨組織工程中重要的種子細(xì)胞。

本申請發(fā)明人課題組前期已在國際上率先提出利用脂肪干細(xì)胞進(jìn)行骨組織再生的新理念，并進(jìn)行了系列相關(guān)體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)，如在裸鼠異位成骨及兔下頜骨缺損動物模型上成功再生骨組織；將自體異體脂肪干細(xì)胞附合生物支架用于組織再生，取得了良好的效果。

LIM-結(jié)構(gòu)域蛋白3(LIM domain only protein 3，LMO3)是一個關(guān)鍵蛋白。LMO3是LMO家族成員之一，其基因位于12號染色體p12.3，含有5個外顯子，全長440bp，由146個氨基酸組成。結(jié)構(gòu)上，LMO3與LMO家族其他成員具有高度的相似性,包含兩個串聯(lián)排列的LIM結(jié)構(gòu)域，該家族在基本生命活動如發(fā)育、分化調(diào)控中有極其重要的作用。

但是，LMO3在脂肪干細(xì)胞中的作用以及與脂肪干細(xì)胞成骨分化及組織再生相關(guān)作用研究，目前未見報道。

發(fā)明內(nèi)容：

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，發(fā)明人通過研究LMO3調(diào)控ADSCs成骨分化和組織再生的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行分子水平研究和體內(nèi)組織再生研究，結(jié)果顯示，LMO3在脂肪干細(xì)胞成骨分化和組織再生過程中起了重要的調(diào)控作用，通過反向論證，當(dāng)LMO3下調(diào)，ADSCs成骨向分化和骨組織再生能力受到抑制，通過本發(fā)明闡明脂肪干細(xì)胞介導(dǎo)組織再生中LMO3的調(diào)控功能，為調(diào)控脂肪干細(xì)胞促進(jìn)骨組織再生提供重要的依據(jù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生基因，具體為LMO3基因，其Gene ID為hsa-55885。

所述的LMO3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

所述的LMO3基因在調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述的調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生產(chǎn)品通過檢測LMO3基因及其表達(dá)來檢測ADSCs成骨分化的程度。

所述的調(diào)控ADSCs成骨分化及組織再生產(chǎn)品至少包括一對特異性擴(kuò)增LMO3基因的引物和標(biāo)準(zhǔn)品，所述的引物由上游和下游引物組成，上游引物具有如5'-C T T T G T G TT G T G T A G C C C T A A C G T C-3'的序列，下游引物具有如5'-ACTCAGCACTCTGTTGGAGTGGA-3'的核苷酸序列。