[發明專利]一種三氯殺螨醇單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202011362424.4
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112625135A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 盛相國
• 申請（專利權）人: 蘇州快捷康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

本發明公開了一種三氯殺螨醇單克隆抗體及其應用，該抗體包括輕鏈可變區和重鏈可變區，輕鏈可變區的CDR1序列如SEQ ID NO：1所示、CDR2序列如SEQ ID NO：2所示、CDR3序列如SEQ ID NO：3所示；重鏈可變區的CDR1序列如SEQ ID NO：4所示、CDR2序列如SEQ ID NO：5所示、CDR3序列如SEQ ID NO：6所示。該抗體對三氯殺螨醇具有較好的檢測靈敏度和添加回收率，可實現對農產品中三氯殺螨醇殘留量的檢測，為三氯殺螨醇殘留量的免疫檢測提供了原料。并且首次測得該抗體的可變區基因序列，為后續抗體試劑應用于檢測試劑盒時采用規?；磉_生產提供了序列基礎。

技術領域

本發明屬于農藥殘留免疫分析技術領域，具體涉及一種三氯殺螨醇單克隆抗體及其應用。

背景技術

三氯殺螨醇 (Dicofol)屬于有機氯殺蟲劑，主要用于防治棉花、果樹、花卉的多種害螨。然而，三氯殺螨醇的殘留對魚類、爬行類、鳥類、哺乳類和人類有毒性和雌激素效應，對水生生物有極高毒性。

目前，對三氯殺螨醇殘留的檢測方法主要是儀器分析方法，包括氣相色譜法(Gaschromatography，GC)、氣相色譜-質譜串聯法(GC-MS)等。這些方法結果可靠，靈敏度高，已有相關的技術標準可供參考。但由于需要昂貴的儀器、專門的操作人員，以及樣品前處理復雜、成本高、時間長，因此不能更好地滿足快速簡便的現場檢測要求。

與儀器分析方法相比，免疫檢測方法因其簡便、經濟、快速等優點而在農藥殘留檢測領域中受到越來越多的關注。ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結果不夠直觀，不能在線進行檢測等缺陷。因而ELISA在三氯殺螨醇的快速檢測上的應用受到很大的限制。膠體金試紙條無需專業操作人員及任何輔助類儀器，根據反應所顯現的條帶幾分鐘即可判定結果，不僅操作簡便、快速，且結果直觀準確、成本低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種三氯殺螨醇單克隆抗體及其應用，該抗體對三氯殺螨醇具有較好特異性和檢測靈敏度，可以用來建立三氯殺螨醇的免疫學檢測方法。

為了實現上述目的，本發明提供以下技術方案：

一種抗三氯殺螨醇的單克隆抗體，包括輕鏈可變區和重鏈可變區，其中，

所述輕鏈可變區的CDR1序列如SEQ ID NO：1所示；

所述輕鏈可變區的CDR2序列如SEQ ID NO：2所示；

所述輕鏈可變區的CDR3序列如SEQ ID NO：3所示；

所述重鏈可變區的CDR1序列如SEQ ID NO：4所示；

所述重鏈可變區的CDR2序列如SEQ ID NO：5所示；

所述重鏈可變區的CDR3序列如SEQ ID NO：6所示。

以上所述輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

本發明所述的單克隆抗體在制備三氯殺螨醇免疫檢測產品中的應用。

抗三氯殺螨醇單克隆抗體的制備步驟為：

（1）免疫原的制備：以三氯殺螨醇為原料，將三氯殺螨醇與琥珀酸酐進行反應得到三氯殺螨醇半抗原琥珀酸酯，再利用活潑酯法將半抗原與KLH反應制備免疫原；利用活潑酯法制備包被抗原，方法與免疫原相同，用BSA代替KLH。

（2）小鼠的免疫：將免疫原與福氏佐劑乳化完全后，通過皮下多點注射免疫BALB/c小鼠；首次免疫采用福氏完全佐劑，加強免疫使用福氏不完全佐劑，沖刺免疫時免疫劑量為前一次免疫劑量的一半，與生理鹽水混合均勻后直接進行腹腔注射；各次免疫間隔為三周；第三次免疫后，間隔一周采血檢測血清效價和抑制；