[發明專利]一種高效液相色譜測定二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量的方法

有效

• 申請號: 202011362323.7
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112630365B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 王冬冬;宗璽;金曉婷;于文淵;劉來富;夏清;楊亮;胡海燕;吉民
• 申請（專利權）人: 江蘇東南納米材料有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/02;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 張鉑

本發明公開了一種二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的高效液相色譜檢測方法。其色譜條件為：色譜柱：用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相：A相為4mmol/L pH＝4的醋酸銨緩沖溶液，B相為4mmol/L醋酸銨甲醇溶液，按一定的梯度洗脫，使用蒸發光散射檢測器(ELSD)，進行高效液相色譜分析，測定二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的含量。本發明通過高效液相檢測，運用反相色譜法，能夠準確測出二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的含量，且與其他有關物質能夠達到很好的分離效果，提高了檢測準確性，且對檢測儀器及色譜柱損害較小。

技術領域

本發明涉及一種利用高效液相色譜測定二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量的方法，屬于儀器分析領域。

背景技術

二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)屬于合成磷脂，廣泛應用于藥用輔料，適合用于改進制劑處方，并制備成多種多樣的脂質體和磷脂復合物。二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿已應用于Visudyne(維替泊芬脂質體)和Abelect(兩性霉素B磷脂復合物)，已收錄于美國食品藥品管理局非活性藥用成分(輔料)數據庫，其質量標準未收載于中國藥典、美國藥典、歐洲藥典中。目前國內外文獻尚無二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量測定方法。

二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿一般可通過化學合成法制得。常用的工業方法使用肉豆蔻酸(十四酸)和磷酸酰膽堿為起始原料，通過縮合反應，并加以提純精制制備。該制備工藝中，肉豆蔻酸為起始原料，也是產物的降解產物。此外，反應中會產生副產物溶血磷脂酰膽堿，同時也是產物降解過程中易產生的化合物。這兩種化合物會干擾二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量檢測的準確性。開發能夠分離二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿和其有關物質的含量檢測方法是非常有必要的。

目前國內外其它磷脂酰膽堿類化合物的含量檢測有TLC法、以紫外檢測器檢測的液相色譜法、以ELSD檢測器檢測的液相正相色譜法等。TLC法無法準確定量檢測，且人為主觀性較大，故含量檢測誤差較大，無法準確的檢測產品含量。因磷脂類化合物幾乎無紫外吸收，故以紫外檢測器檢測的液相色譜法，檢測波長一般選擇190～210nm之間，該檢測波長下流動相所用溶劑等干擾較大，樣品響應值也較低，含量檢測的重復性及準確性都較差。中國藥典中大豆磷脂及蛋黃卵磷脂的質量標準中，磷脂酰膽堿的含量檢測以ELSD檢測器，用硅膠為填充劑的色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇等為溶劑的正相色譜法檢測，該方法對色譜柱及儀器的損害較大。且以上磷脂或磷脂酰膽堿類化合物含量的檢測均未有專門針對二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的含量檢測。

發明內容

針對目前尚無二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的含量測定方法，本發明提供一種二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿的高效液相色譜測定方法，可有效解決上述問題，對二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿進行準確測定。

為達到上述發明目的，本發明實施了如下的技術方案：

一種高效液相色譜測定二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿含量的方法，色譜條件為：色譜柱：高效液相反相色譜柱；流動相：A相為醋酸銨緩沖溶液，B相為醋酸銨甲醇溶液；蒸發光散射檢測器，梯度洗脫。

優選的，色譜條件為：

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，在不影響檢測效果的情況下，優選色譜柱的長度為150mm，直徑為4.6mm，填料粒徑為3.5μm。例如：Agilent Eclipse Plus C18柱(4.6×150mm，3.5μm)。

采用流動相A和流動相B為混合流動相進行梯度洗脫，流動相：A相為4mmol/L pH＝4的醋酸銨緩沖溶液，B相為4mmol/L醋酸銨甲醇溶液。

梯度洗脫程序為：

在0～8分鐘內，流動相A和流動相B由初始體積比15:85線性梯度變至0:100，以100％B相持續洗脫至第14分鐘，在14.01分時，改用體積比15:85流動相A和流動相B的混合溶液持續洗脫至結束。

具體的，梯度洗脫條件如下表所示：