[發明專利]一種廚余高效堆肥用高溫菌劑制備方法

在審

• 申請號: 202011361845.5
• 申請日: 2020-11-28
• 公開（公告）號: CN112322498A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 袁增偉;王夏夏;張詩文;李肖
• 申請（專利權）人: 南京大學（溧水）生態環境研究院
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12Q1/04;C05F17/20
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 杜靜靜

1.一種廚余高效堆肥用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟1）采集分離：將廚余堆肥高溫期堆肥樣品梯度稀釋后涂布于牛肉膏蛋白胨培養基平板上，倒置于60~70℃培養箱中培養24-48h，將形態特征不同的菌落挑出經過3-5次劃線純化和高溫培養后分離得到耐高溫純菌株；

步驟2）酶活實驗：將分離得到的耐高溫純菌株分別接種至纖維素剛果紅培養基、愈創木酚選擇培養基、蛋白選擇培養基中，培養后篩選出分別能夠分解纖維素、木質素和蛋白質的專一高效菌株；

步驟3）菌種發酵：根據步驟2）實驗結果挑選能夠分解纖維素、木質素和蛋白質的菌株，將菌株分別接種于改良的牛肉膏蛋白胨固態斜面上，在65℃-70℃下培養24-48h得到豐厚的培養斜面，分別取培養至豐厚的斜面1個，接種至1000ml已經滅菌的改良的牛肉膏蛋白胨液態培養基中，置于恒溫搖床上，在65℃-70℃、轉速180rpm震蕩培養24-48h得到發酵種子液；

步驟4）菌液復配：將纖維素、木質素、蛋白質分解菌的發酵菌液分別按照1~3:1~2:1~5體積比進行復合配比；

步驟5）制備固態高溫菌劑：以有機廢棄物產品為載體與菌液混合，干燥、粉碎、篩分得到能夠分解纖維素、木質素、蛋白質的堆肥固態高溫菌劑。

2.根據權利要求1所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述有機廢棄物產品載體為園林垃圾或綠化垃圾堆肥腐熟期樣品產品，粒徑在5mm以下，含水率在40%以下。

3.根據權利要求2所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述菌液與腐熟堆肥的質量比為1~3：20。

4.根據權利要求3所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述菌劑活菌含量達到1×10⁹cfu/g以上。

5.根據權利要求3或4所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述菌液活菌含量達到1×10¹²cfu/mL以上。

6.根據權利要求5所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述固態高溫菌劑與廚余混合的質量比為0.5~2:10。

7.根據權利要求5所述的廚余堆肥專用高溫菌劑制備方法，其特征在于，所述改良的牛肉膏蛋白胨配方為：牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl5.0 g，瓊脂10-15g，浸提液1000ml，pH7.4-7.6；

所述浸提液制備方法為：稱取100-150g廚余堆肥腐熟期產品，加入300ml蒸餾水,在室溫下，180-200rpm震蕩10-16小時；取液體在4000rpm下離心10-20min，收集上清液即為浸提液母液，使用時用蒸餾水稀釋3-5倍即可；所述改良牛肉膏蛋白胨液態培養基和固態培養基的區別是不含瓊脂。