[發明專利]一種產α-蒎烯的解脂耶氏酵母基因工程菌及其應用

有效

• 申請號: 202011361363.X
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112300952B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 韋柳靜;鐘馭濤;花強;聶明月;陳駿
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P5/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明;趙孟琴

1.一種產α-蒎烯的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，先利用CRISPR/Cas9系統，將3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因HMG1、優化并截短的橙花二磷酸合酶1基因NDPS1和帶有TEF啟動子的優化并截短的蒎烯合酶基因P_TEF-tPS依次導入尿嘧啶和亮氨酸營養缺陷型解脂耶氏酵母的染色體中構建獲得可以生產α-蒎烯的解脂耶氏酵母基因工程菌YT-14；再利用解脂耶氏酵母rDNA位點多拷貝整合型質粒pUC19-rDNA-HisG，構建含有帶有TEF啟動子的優化并截短的蒎烯合酶基因P_TEF-tPS和磷酸甲羥戊酸激酶基因ERG8的重組載體，并轉化解脂耶氏酵母基因工程菌YT-14，得到解脂耶氏酵母基因工程菌YT-29；再利用解脂耶氏酵母整合型質粒pINA1269，構建含有3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因HMG1和帶有MBP標簽的甲羥戊酸激酶基因ERG12，并轉化解脂耶氏酵母基因工程菌YT-29，得到解脂耶氏酵母基因工程菌YT-30，其中，

所述帶有TEF啟動子的優化并截短的蒎烯合酶基因P_TEF-tPS的核苷酸序列如SEQ?IDNo.1所示；所述MBP標簽的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；質粒pUC19-rDNA-HisG的核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示；優化并截短的橙花二磷酸合酶1基因NDPS1的核苷酸序列參見專利申請號為201610817882.X，質粒pINA1269采用Madzak?C,Tréton?B?and?RolandSB.Strong?hybrid?promoters?and?integrative?expression/secretion?vectors?forquasi-?constitutive?expression?of?heterologous?proteins?in?the?yeast?Yarrowialipolytica.J?Mol?Microbiol?Biotechnol.(2000)2(2):207-216所記載的制備方法制得獲得。

2.一種如權利要求1所述的產α-蒎烯的解脂耶氏酵母基因工程菌在生產α-蒎烯中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的產α-蒎烯的解脂耶氏酵母基因工程菌利用葡萄糖生產α-蒎烯。