[發明專利]一種檢測乳中2’-巖藻糖基乳糖的方法

在審

• 申請號: 202011360501.2
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112526021A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 葉文慧;劉彪;喻斌斌;張立君;白沙沙;崔亞娟;周名橋
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王洋

1.一種檢測乳中2’-巖藻糖基乳糖的方法，包括以下步驟：

樣品前處理步驟：在液態乳或將乳粉溶于水獲得的乳粉溶液中，加入蛋白質沉淀劑沉淀蛋白，然后過濾；

樣品凈化步驟：利用濾膜和凈化柱對樣品進行凈化；

樣品檢測步驟：通過陰離子交換色譜進行測定。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述蛋白質沉淀劑選自酸溶液或有機溶劑。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述酸溶液為磺基水楊酸溶液或醋酸溶液，所述有機溶劑為乙醇或乙腈；優選地，所述蛋白質沉淀劑為磺基水楊酸溶液，更優選地，磺基水楊酸溶液的濃度為1wt％5wt％。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，過濾之前進行超聲提取或振蕩提取，優選地，超聲提取或振蕩提取的時間為5-15min。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述凈化柱依次采用甲醇和水進行活化；所述凈化柱為DionexOnGuard II RP凈化柱。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述濾膜為0.45μm濾膜。

7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述陰離子交換色譜的流動相A為去離子水，流動相B為NaOH溶液。

8.根據權利要求1所述的方法，其中，所述陰離子交換色譜的流動相A為去離子水，流動相B為100-300mM NaOH水溶液。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，陰離子交換色譜采用二元梯度洗脫：第一階段采用體積比為50％-60％流動相A和30％-40％流動相B，洗脫時間15-25分鐘；第二階段采用體積比為90％-100％流動相B；洗脫用時5-15分鐘，第三階段采用體積比為50％-60％流動相A和30％-40％流動相B，洗脫時間5-15分鐘。

10.根據權利要求8所述的方法，其中，陰離子交換色譜采用二元梯度洗脫：第一階段采用體積比為60％流動相A和40％流動相B，洗脫時間15-25分鐘；第二階段采用體積比為100％流動相B；洗脫用時5-15分鐘，第三階段采用體積比為60％流動相A和40％流動相B，洗脫時間5-15分鐘。

11.根據權利要求10所述的方法，其中，陰離子交換色譜采用二元梯度洗脫：0～20min流動相A為60％，流動相B為40％；

20～20.1min流動相A為60％～0％，流動相B為40％～100％；

20.1～30min流動相A為0％，流動相B為100％；

30～30.1min流動相A為0％～60％，流動相B為100％～40％；

30.1～40min流動相A為60％，流動相B為40％。

12.根據權利要求1所述的方法，其中，所述陰離子交換色譜的色譜柱為DIONEXCarboPacTM PA1柱或Dionex CarboPac PA20；檢測器為電化學檢測器；所述陰離子交換色譜的條件為：流動相流速0.8-1.0mL/min，柱溫30-35℃，進樣體積10-50μL。