[發(fā)明專利]一種富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011355930.0
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112444437B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李智立;賴治臻;張沫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/38;G01N1/40;C08G73/02
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

本發(fā)明公開了一種富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料的制備方法和應(yīng)用，磁性聚苯胺納米材料是先由六水合三氯化鐵、乙二醇及無水乙酸鈉高溫加熱制得磁性納米材料后，再在其表面包覆聚苯胺制得。富集糖肽方法為：將磁性聚苯胺納米材料分散液加入到糖蛋白胰酶酶切產(chǎn)物中，振蕩富集；將富集液磁分離后，向富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料中加入洗脫液進(jìn)行振蕩洗脫，而后進(jìn)行磁分離，得到糖肽富集溶液。本發(fā)明材料和方法不僅可以獲得更豐富的蛋白糖基化修飾信息和更準(zhǔn)確的聚糖糖型，并且在不破壞蛋白質(zhì)糖基化修飾結(jié)構(gòu)的條件下，實現(xiàn)低成本、環(huán)境友好、高特異性地富集分離，操作簡便，為復(fù)雜樣本中蛋白質(zhì)糖基化修飾研究和相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的篩查等提供了新型材料和技術(shù)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)及多肽富集技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料的制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)糖基化是最重要的翻譯后修飾之一，在細(xì)胞間相互作用、免疫防御、細(xì)胞生長和分化等多種生物過程中發(fā)揮著重要的結(jié)構(gòu)和功能作用。一些重要蛋白上的異常糖基化與各種疾病如癌癥和神經(jīng)肌肉疾病高度相關(guān)。N-糖基化蛋白對疾病預(yù)后、診斷和藥物治療反應(yīng)也很重要。因此，蛋白質(zhì)糖基化分析不僅對生物醫(yī)學(xué)研究有重要意義，對生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)也有重要意義。目前，以質(zhì)譜(MS)為基礎(chǔ)的技術(shù)已成為表征蛋白質(zhì)糖基化的最重要和強有力的工具。然而，糖蛋白的高動態(tài)范圍、固有的低糖肽豐富度以及非糖基化肽共存所導(dǎo)致的嚴(yán)重離子抑制效應(yīng)，使得糖肽/糖肽的直接質(zhì)譜分析成為一個挑戰(zhàn)。因此，在進(jìn)行質(zhì)譜分析之前，從高度復(fù)雜的混合物中有效地提取糖蛋白/糖肽是絕對必要的。

多種方法包括親水性相互作用色譜(HILIC)、凝集素親和層析、肼化學(xué)和硼酸化學(xué)已被用于富集糖蛋白/糖肽。其中，基于親水性相互作用色譜的富集策略由于操作過程簡單，重現(xiàn)性好，無偏置，避免聚糖組成的不可逆改變，近年來得到了較好的發(fā)展，并越來越受歡迎。近年來，磁分離法已成為一種有效的分離技術(shù)，與傳統(tǒng)方法相比，磁分離法能取得更好的分離效果。將基于親水性相互作用液相色譜的策略與磁分離技術(shù)相結(jié)合，同時利用兩者的優(yōu)點，可以快速高效地從復(fù)雜的生物樣品中捕獲糖肽，而后進(jìn)行分析。

因此，提供一種能在不破壞糖肽結(jié)構(gòu)的前提下，實現(xiàn)糖肽聚糖或糖苷的高效、低成本、特異性富集分離的磁性聚苯胺納米材料的制備方法和應(yīng)用是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種利用磁性聚苯胺納米材料結(jié)構(gòu)中大量亞胺基團(tuán)可以與糖鏈O-H形成氫鍵的特性，以及共軛結(jié)構(gòu)特有的π相互作用吸附性能，在不破壞糖肽結(jié)構(gòu)的前提下，實現(xiàn)糖肽聚糖或糖苷的高效、低成本、特異性富集分離的材料及其應(yīng)用方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料的制備方法，包括以下步驟：

(1)將六水合三氯化鐵溶于乙二醇中并攪拌至溶液呈黃色，向溶液中加入無水乙酸鈉并繼續(xù)攪拌1小時，然后轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜于烘箱中200℃加熱16小時，將產(chǎn)物清洗并在烘箱中60℃烘干，制得磁性納米材料；

(2)將鹽酸水溶液與苯胺溶液混合，并避光冰浴10分鐘，然后加入磁性納米材料，繼續(xù)避光冰浴攪拌10分鐘；向混合液中加入過硫酸銨水溶液，再次避光冰浴攪拌4小時，將產(chǎn)物清洗并在烘箱中60℃烘干，得富集糖肽的磁性聚苯胺納米材料。

本發(fā)明技術(shù)方案的有益效果在于：本發(fā)明中磁性聚苯胺納米材料對糖肽和/或聚糖和/或糖苷具有很好的富集效果，富集產(chǎn)物純度接近100％，回收率100％。

進(jìn)一步，上述步驟(1)中六水合三氯化鐵與無水乙酸鈉的質(zhì)量比為1：1.8-3.6；

所述清洗方法為依次采用無水乙醇、50％乙醇、超純水和體積分?jǐn)?shù)80％乙腈水溶液及乙腈進(jìn)行振蕩洗滌。

采用上述進(jìn)一步的有益效果在于：在本發(fā)明限定的比例下制得的磁性納米材料大小合適且尺寸均一。