[發明專利]一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法及應用

有效

• 申請號: 202011354327.0
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112485236B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 陳飄飄;應斌武;瞿潤連;何雅秦
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院;成都華西精準醫學產業技術研究院有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 李俊

本發明提供了一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法，涉及診斷分析技術領域，該方法包括基于QDs選擇性識別Cu²⁺和Cu²⁺與PPi形成的復合物，以及Ce³⁺選擇性識別PPi和其它磷酸鹽，以得到QDs的熒光信號和PPi?Ce CPNs的熒光信號，并基于QDs的熒光信號和PPi?Ce CPNs的熒光信號定量單一目標物。本發明使用PPi?Ce CPNs和QDs作為雙熒光信號分子，定量分析目標物，提高方法的準確性，同時將發光納米材料Ce³⁺引入生物化學和醫學診斷中，實現可視化POCT分析。以及本發明的分析方法可用于焦磷酸酶或者堿性磷酸酶的分析。

技術領域

本發明涉及生物醫學診斷分析方法技術領域，尤其是涉及一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法及應用。

背景技術

現有生物化學和醫學診斷體系中，主要是依靠單個信號分子的信號強度實現對單一目標物的定量分析。如基于免疫識別反應的酶聯免疫吸附分析(ELISA)使用紫外可見分光光度計監測紫外信號、電化學發光策略監測三吡啶釕等的電化學信號、熒光策略監測熒光染料的熒光信號(如FITC、FAM等)等。

雖然，有少數研究者使用雙信號分子實現目標分析，其主要是以一種信號分子為內標，以另外一個信號分子的變化而實現定量，即其被稱之為比率策略。此外，以上比率策略中，兩個信號分子間不存在相互作用，即嚴格講體系僅僅對單個信號分子產生影響，并非是雙信號策略。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法，以解決現有技術中依靠單個信號分子實現目標物的定量，且難以可視化讀取。此外，即使有少數研究者使用雙信號分子實現目標分析，其為比率策略，也并非雙信號策略的技術問題。

本發明的目的之二在于提供一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法的應用。

為了實現上述目的之一，本發明一實施例提供了一種基于多種選擇性識別反應的均相可視化和雙熒光信號分析方法，所述方法包括基于QDs選擇性識別Cu²⁺和Cu²⁺與PPi形成的復合物，以及Ce³⁺選擇性識別PPi和其它磷酸鹽，以得到QDs的熒光信號和PPi-Ce CPNs的熒光信號，并基于QDs的熒光信號和PPi-Ce CPNs的熒光信號定量單一目標物。

根據一種優選實施方式，所述Cu²⁺與PPi形成的復合物包括PPi-Cu²⁺-PPi復合物。

根據一種優選實施方式，所述的基于QDs選擇性識別Cu²⁺和PPi-Cu²⁺-PPi復合物以得到QDs的熒光信號。包括利用QDs與Cu²⁺和PPi-Cu²⁺-PPi復合物進行選擇性陽離子交換反應，基于Cu²⁺和PPi-Cu²⁺-PPi復合物分別以不同程度淬滅QDs熒光信號，以使各體系分別產生明顯不同的可視化的顏色改變。

根據一種優選實施方式，所述Cu²⁺可顯著淬滅QDs的熒光信號，所述PPi-Cu²⁺-PPi復合物可抑制Cu²⁺對QDs熒光信號的淬滅。

根據一種優選實施方式，所述Ce³⁺選擇性識別PPi和其它磷酸鹽以得到PPi-CeCPNs的熒光信號。包括利用Ce³⁺與PPi和其它磷酸鹽進行選擇性配位聚合反應，形成的PPi-Ce CPNs可發射熒光信號。

根據一種優選實施方式，所述PPi-Ce CPNs的熒光信號在348nm處出峰，所述QDs的熒光信號在670nm處出峰。