[發明專利]一種谷氨酸脫氫酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 202011353159.3
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112280760B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 穆曉清;徐巖;周峰
• 申請（專利權）人: 宿遷市江南大學產業技術研究院
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P41/00;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種谷氨酸脫氫酶突變體，其特征在于，所述谷氨酸脫氫酶突變體為，將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脫氫酶的第116位氨基酸由賴氨酸突變為絲氨酸，并將第348位氨基酸由天冬酰胺突變為亮氨酸；

或將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脫氫酶的第116位氨基酸由賴氨酸突變為谷氨酸，并將第348位氨基酸由天冬酰胺突變為蛋氨酸；

或將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脫氫酶的第116位氨基酸由賴氨酸突變為谷氨酰胺，并將第348位氨基酸由天冬酰胺突變為蛋氨酸。

2.編碼權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶突變體的基因。

3.攜帶權利要求2所述基因的重組質粒。

4.如權利要求3所述的重組質粒，其特征在于，以pET-28a為出發質粒。

5.一種重組細胞，其特征在于，所述重組細胞攜帶權利要求2所述基因，或攜帶權利要求3或4所述的重組質粒。

6.如權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述重組細胞以細菌或真菌為宿主細胞。

7.權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶突變體的制備方法，所述方法為：將權利要求5或6所述的重組細胞接入到培養基中，于37℃條件下培養至菌密度OD達到0.5-0.7后，加入IPTG誘導劑，于17℃誘導15-17h后收集菌液，將得到的菌液離心收集菌體，將得到的菌體經重懸、破碎后得到細胞破碎液，將細胞破碎液離心收集上清液，分離上清液中的谷氨酸脫氫酶突變體。

8.一種(R)-4-氨基戊酸的合成方法，其特征在于，所述方法為：將權利要求1所述的突變體加入到含有葡萄糖脫氫酶、4-氧代戊酸、葡萄糖和NH₄Cl-NH₃·H₂O緩沖液的反應體系中進行反應得到。

9.權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶突變體，或權利要求2所述的基因，或權利要求3或4所述的重組質粒，或權利要求5或6所述重組細胞在制備(R)-4-氨基戊酸中的應用。