[發(fā)明專利]三維培養(yǎng)腸及腸癌組織類器官的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011348002.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN112481193A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李軍;李存;鄭云波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海西紡織新材料工業(yè)技術(shù)晉江研究院;李羽舟
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/09
• 代理公司: 泉州協(xié)創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35231
• 代理人: 鄭浩

本發(fā)明公開了一種三維培養(yǎng)腸及腸癌組織類器官的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基包括試劑A、試劑B和試劑C中的至少一種或多種；試劑A包含N?乙酰半胱氨酸、Y?27632、A8301、重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和胃泌素中的一種或多種；試劑B包含R?spondin1、Noggin、煙酰胺和SB202190中的一種或多種；試劑C包含Wnt?3A。本發(fā)明的培養(yǎng)基針對(duì)于腸組織中成體干細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)，選用了多種生長(zhǎng)因子成份進(jìn)行調(diào)和，經(jīng)過優(yōu)化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)因子的配比，腸的成體干細(xì)胞和腸癌的細(xì)胞能夠有效地在三維培養(yǎng)環(huán)境中分別形成腸的類器官和腸癌的類器官。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三維培養(yǎng)腸及腸癌組織類器官的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

類器官技術(shù)是近些年生物學(xué)領(lǐng)域一項(xiàng)重大的突破。通過類器官培養(yǎng)技術(shù)，科學(xué)家們建立起了全新的體外培養(yǎng)的模型，用來(lái)培養(yǎng)正常或者病變癌組織。正常類器官可以模擬正常組織的形態(tài)，結(jié)構(gòu)和功能性特征；癌的類器官表現(xiàn)出在體癌腫的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，基因突變譜和表型特點(diǎn)。正常及癌類器官可以在體外長(zhǎng)期穩(wěn)定的培養(yǎng)，所以類器官培養(yǎng)技術(shù)可以將大部分活體的生物學(xué)過程在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，這一革命性的技術(shù)進(jìn)步為癌癥及人體生物學(xué)的研究建立一個(gè)全新的平臺(tái)，腫瘤類器官更是為腫瘤患者的個(gè)性化治療提供巨大的幫助。目前科學(xué)家們已經(jīng)成功建立了人體主要器官及其腫瘤的類器官培養(yǎng)體系。

然而，作為一項(xiàng)新興的技術(shù)，很多器官的類器官三維培養(yǎng)缺少標(biāo)準(zhǔn)化的培養(yǎng)基。盡管已有報(bào)道在不同三維培養(yǎng)條件下，可以成功培養(yǎng)出腸的類器官。但是，到目前為止，還沒有一種標(biāo)準(zhǔn)化的培養(yǎng)基。這種現(xiàn)狀制約了腸和腸癌類器官的在研究和臨床治療中的廣泛的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決腸組織體外類器官培養(yǎng)過程中缺少標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種三維培養(yǎng)腸及腸癌組織類器官的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，本發(fā)明的培養(yǎng)基針對(duì)于腸組織中成體干細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)，選用了多種生長(zhǎng)因子成份進(jìn)行調(diào)和，經(jīng)過優(yōu)化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)因子的配比，腸的成體干細(xì)胞和腸癌的細(xì)胞能夠有效地在三維培養(yǎng)環(huán)境中分別形成腸的類器官和腸癌的類器官。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種三維培養(yǎng)腸及腸癌組織類器官的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基，包括試劑A、試劑B和試劑C中的至少一種或多種；

試劑A包含N-乙酰半胱氨酸、Y-27632、A8301、重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和胃泌素中的一種或多種；

試劑B包含R-spondin1、Noggin、煙酰胺和SB202190中的一種或多種；

試劑C包含Wnt-3A。

優(yōu)選地，在試劑A中，以標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基的終體積為基準(zhǔn)來(lái)計(jì)算，N-乙酰半胱氨酸的濃度為0.1~10mM，Y-27632的濃度為0.5~50uM，A8301的濃度為50~5000nM，重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度為5~500ng/ml，胃泌素的濃度為1~100nM。

優(yōu)選地，在試劑B中，以標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基的終體積為基準(zhǔn)來(lái)計(jì)算，R-spondin1的濃度為10%，Noggin的濃度為10%，煙酰胺的濃度為1~100mM，SB202190的濃度為1~100uM。

優(yōu)選地，在試劑C中，以標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基的終體積為基準(zhǔn)來(lái)計(jì)算，Wnt-3A的濃度為5%。

優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基用于建立和擴(kuò)增腸類器官時(shí)，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基包括試劑A、試劑B、試劑C、B27、Primocin和基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基用于分化培養(yǎng)腸類器官時(shí)，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基包括試劑A、B27、Primocin和基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基用于建立和擴(kuò)增腸癌類器官時(shí)，所述標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基包括試劑A、試劑B、B27、Primocin和基礎(chǔ)培養(yǎng)基。