[發(fā)明專利]AKT新底物HIP-55的磷酸化抗體產(chǎn)品制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011345216.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN112480249B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李子健;姜允奇;何丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)第三醫(yī)院（北京大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院）
• 主分類號(hào): C07K16/18
• 分類號(hào): C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 張立娜

本發(fā)明公開了AKT新底物HIP?55的磷酸化抗體產(chǎn)品制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種制備HIP?55蛋白S269或T291位點(diǎn)磷酸化抗體的方法，包括如下步驟：以抗原合成肽作為免疫原，免疫動(dòng)物，收集抗血清，純化后得所述HIP?55蛋白S269或T291位點(diǎn)磷酸化抗體；所述抗原合成肽為在半抗原合成肽的N端連接一個(gè)半胱氨酸后與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)所得；所述半抗原合成肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示，且對(duì)應(yīng)HIP?55蛋白的S269或T291位點(diǎn)修飾有磷酸基團(tuán)。本發(fā)明HIP?55磷酸化抗體具有很好的敏感性和特異性，可用于檢測(cè)HIP?55與AKT互作，進(jìn)而用于輔助診斷心肌梗死。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及AKT新底物HIP-55的磷酸化抗體產(chǎn)品制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

自首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT(又稱作蛋白激酶B或PKB)作為一種原癌基因，已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界主要的關(guān)注熱點(diǎn)，這是因?yàn)樗谡{(diào)控各種不同生理或者病理功能(包括代謝、生長(zhǎng)、增殖、存活、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)合成)方面發(fā)揮重要作用。AKT主要通過(guò)調(diào)控其各種底物發(fā)揮重要的生理或者病理功能。如AKT通過(guò)直接磷酸化AKT底物p21和p27，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程；AKT通過(guò)直接磷酸化促凋亡蛋白Bad或轉(zhuǎn)錄因子FoxO，而產(chǎn)生抑制凋亡信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞存活；AKT通過(guò)激活底物AS160對(duì)調(diào)節(jié)生物體糖代謝發(fā)揮重要作用。由于AKT通過(guò)調(diào)節(jié)其不同底物蛋白進(jìn)而調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能，并在眾多生物學(xué)進(jìn)程中都扮演著重要角色，這使得調(diào)控AKT和/或其底物蛋白成為人類疾病治療的重要靶標(biāo)。

HIP-55(hematopoietic progenitor kinase 1[HPK1]-interacting protein of55kDa；也稱為drebrin-like protein DBNL、mAbp1或SH3P7)是一個(gè)包含多功能域的蛋白質(zhì)。其結(jié)構(gòu)主要包含著N端的F-actin蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域和C端SH3結(jié)構(gòu)域。

目前對(duì)于HIP-55的蛋白性質(zhì)了解不多，還沒(méi)有研究表明HIP-55與AKT之間的關(guān)系。更沒(méi)有HIP-55磷酸化抗體的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供AKT新底物HIP-55的磷酸化抗體產(chǎn)品制備方法與應(yīng)用。

第一方面，本發(fā)明要求保護(hù)一種制備HIP-55蛋白S269位點(diǎn)磷酸化抗體的方法。

本發(fā)明要求保護(hù)的制備HIP-55蛋白S269位點(diǎn)磷酸化抗體的方法，可包括如下步驟：以抗原合成肽A作為免疫原，免疫動(dòng)物，收集抗血清，純化后得所述HIP-55蛋白S269位點(diǎn)磷酸化抗體。

所述抗原合成肽A為在半抗原合成肽A的C端連接一個(gè)半胱氨酸后與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)所得；所述半抗原合成肽A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，第6位氨基酸殘基S修飾有磷酸基團(tuán)。

第二方面，本發(fā)明要求保護(hù)一種制備HIP-55蛋白T291位點(diǎn)磷酸化抗體的方法。

本發(fā)明要求保護(hù)的制備HIP-55蛋白T291位點(diǎn)磷酸化抗體的方法，可包括如下步驟：以抗原合成肽B作為免疫原，免疫動(dòng)物，收集抗血清，純化后得所述HIP-55蛋白T291位點(diǎn)磷酸化抗體。

所述抗原合成肽B為在半抗原合成肽B的N端連接一個(gè)半胱氨酸后與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)所得；所述半抗原合成肽B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，第7位氨基酸殘基T修飾有磷酸基團(tuán)。

在第一方面和第二方面中，所述動(dòng)物均可為兔子(如日本大耳兔)。所述載體蛋白均可為血藍(lán)蛋白(KLH)。

第三方面，本發(fā)明要求保護(hù)HIP-55蛋白磷酸化抗體。

本發(fā)明要求保護(hù)的HIP-55蛋白磷酸化抗體，可為如下任一：

(A1)利用前文第一方面中所述方法制備得到的HIP-55蛋白S269位點(diǎn)磷酸化抗體；