[發明專利]用于構建TPH2基因突變的抑郁癥克隆豬核供體細胞的CRISPR/Cas9系統

有效

• 申請號: 202011343904.6
• 申請日: 2020-11-25
• 公開（公告）號: CN112522313B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 牛冬;汪滔;陶裴裴;劉璐;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;馬翔;黃彩云
• 申請（專利權）人: 南京啟真基因工程有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.一種用于豬TPH2基因編輯的CRISPR/Cas9系統，其特征在于包含Cas9表達載體和針對豬TPH2基因的gRNA表達載體；所述的Cas9表達載體為質粒全序列如SEQ?ID?NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO載體；所述的針對豬TPH2基因的gRNA表達載體由SEQ?ID?NO.25和SEQ?ID?NO.26所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA的限制性內切酶BbsI位點所得；所述的載體骨架pKG-U6gRNA，質粒全序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述的gRNA表達載體和Cas9表達載體的摩爾比為3:1。

2.權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統在構建豬TPH2基因突變的豬重組細胞中的應用。

3.一種重組細胞，其特征在于由權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統共轉染豬原代成纖維細胞經驗證后所得。

4.權利要求3所述的重組細胞在構建TPH2基因敲除的克隆豬中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述的重組細胞在構建TPH2基因敲除的抑郁癥克隆豬中的應用。