[發明專利]一種非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA、呈遞細胞及應用

有效

• 申請號: 202011337705.4
• 申請日: 2020-11-25
• 公開（公告）號: CN112126644B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 賈明明;陳立;黎小珠;俞洋洋
• 申請（專利權）人: 北京立康生命科技有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N5/10;A61K39/00;A61P31/00;A61P37/02;A61P35/00
• 代理公司: 北京華專卓海知識產權代理事務所(普通合伙) 11664
• 代理人: 王一

本發明提供一種非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA、呈遞細胞及應用，涉及生物技術領域，本發明提供的外源mRNA能夠在非依賴帽結構下使真核細胞中的核糖體啟動的翻譯表達；本發明提供的應用可以轉錄上述mRNA，且至少具有SEQ ID NO.1?3任一所示的核苷酸序列；本發明提供的mRNA、核苷酸序列可以用于制備蛋白表達異常相關的mRNA疫苗，還可以用于篩選和/或評估抗原表位。本發明提供的mRNA可以不依賴帽結構直接進行翻譯，穩定性好，持續翻譯時間增長，打破了通過“加帽”來提高mRNA穩定性、起始翻譯的方式，極大地降低了成本，普適性廣，社會效益顯著。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA、呈遞細胞及應用。

背景技術

mRNA作為一種非病毒基因載體，通過外源合成的mRNA進行修飾、表達，可形成高活性的表達蛋白，并且通過細胞或其它給藥載體可產生蛋白表達。目前常用于基因治療和細胞治療的病毒載體方案具有生產難度大、成本高、基因整合風險較高， 而mRNA生產方便、半衰期短、無整合風險、安全性高，具有廣闊的應用前景。

常規mRNA體外制備方案，常使用5’帽結構來提高mRNA的穩定性并起始翻譯。常用的加帽方案有牛痘加帽酶處理、帽子結構（m7GpppG）和抗反轉帽結構類似物（3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G ）等方案。其中，添加帽結構類似物的mRNA生產方案加帽效率低，無法完全滿足目前mRNA制備及生產的實際需求；而使用牛痘加帽酶處理方案制備和純化較為繁瑣，雜質殘留的風險升高。因此，開發能夠產生較為穩定的低成本的mRNA體外轉錄替代方案，對于拓展體外轉錄mRNA的應用場景、促進mRNA藥物的開發具有十分重要的意義。

發明內容

為解決現有技術存在的問題，本發明提供一種轉入細胞后能夠穩定轉錄翻譯的外源mRNA，本發明提供的mRNA可以在不依賴帽結構的情況下，使真核細胞的核糖體穩定地啟動翻譯，替代了目前的需要通過“加帽”方式來提高mRNA穩定性的技術，打破了現有技術的壟斷，也為促進我國，乃至國際上腫瘤疫苗及其他蛋白表達異常疫苗的制備、篩選及藥效評估提供一個快速、經濟渠道，為新型治療手段的研發及臨床試驗提供一個新的途徑。

為實現本發明的技術目的，本發明一方面提供一種非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA，至少具有SEQ ID NO.1-3任一所示的核苷酸序列。

為實現本發明的技術目的，本發明另一方面提供一種呈遞細胞，其為負載有上述的非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA的樹突狀細胞。

為實現本發明的技術目的，本發明還提供一種將上述的mRNA用于制備蛋白異常表達相關疾病mRNA疫苗的用途。

其中，所述將上述mRNA用于制備蛋白異常表達相關疾病mRNA疫苗是用抗原表位序列信息將上述mRNA的編碼區替換即可。

其中，所述蛋白異常表達相關疾病包括但不限于感染性疾病、自身免疫缺陷病、腫瘤或其相關疾病。

為實現本發明的技術目的，本發明再提供一種將上述的mRNA用于篩選或/和評估抗原表位/mRNA疫苗的用途。

其中，所述將上述mRNA用于篩選或/和評估抗原表位是將待篩選或/和評估的抗原表位插入到上述mRNA的編碼區，進行細胞外轉錄，細胞內翻譯，最后檢測免疫反應結果，根據免疫反應結果篩選或/和評估抗原表位。

有益效果

1、本發明提供的非依賴帽結構下進行細胞外轉錄的mRNA可以穩定的進行翻譯，而且可以使真核細胞中的核糖體直接啟動mRNA的翻譯，解決了目前需要使用加帽的方式才能啟動mRNA的翻譯的技術問題，同時也降低體外轉錄過程中的風險引入和成本。