[發明專利]一種基于金屬-多酚網絡結構的靶向納米疫苗制備及其產品

在審

• 申請號: 202011337685.0
• 申請日: 2020-11-25
• 公開（公告）號: CN112245407A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 翟淑梅;楊勛成;崔基煒;張貴強;張培育;孫海峰
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/04;A61K47/26;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

本發明公開了一種基于金屬?多酚網絡結構的靶向納米疫苗的制備方法，是通過制備負載卵清蛋白OVA的介孔二氧化硅納米顆粒，合成甘露糖修飾單寧酸分子，負載卵清蛋白OVA的介孔二氧化硅納米顆粒表面涂覆金屬?多酚網絡涂層，得到表面涂覆金屬?多酚網絡涂層的負載OVA的介孔二氧化硅納米顆粒，此即為基于金屬?多酚網絡結構的靶向納米疫苗，命名為MS@OVA@MPN@Man。本發明通過表面涂覆金屬?多酚網絡涂層防止OVA的泄露并增加納米顆粒的溶酶體逃逸功能；同時在表面修飾甘露糖，靶向免疫細胞表面的甘露糖受體，增強細胞對其攝取能力以提高疫苗遞送效率，解決了納米疫苗靶向性以及溶酶體逃逸效率的難題。

技術領域

本發明涉及一種納米疫苗制備及其產品，尤其涉及一種基于金屬-多酚網絡結構的靶向納米疫苗制備及其產品，屬于納米材料和生物醫藥技術領域。

背景技術

納米技術是21世紀科技發展的制高點，是新工業革命的主導技術。由于納米顆粒具有獨特的結構、磁性、機械和尺寸效應，被廣泛用于包括生物傳感、藥物輸送、生物成像、催化、納米制造、潤滑、電子、紡織等領域。而目前研究的熱點之一是研究和探索用于生物醫學領域的各種納米粒子系統，尤其是應用于腫瘤治療的納米粒子，包括介孔二氧化硅、金屬納米粒子、磁性氧化物以及量子點等無機納米粒子系統。

在腫瘤的各種治療方式中，利用宿主免疫系統抑制腫瘤生長的免疫療法在治療和預防癌癥復發方面具有巨大應用潛力。治療性腫瘤疫苗是腫瘤免疫療法的一個重要組成部分。近幾年，傳統腫瘤疫苗取得了不錯的進展，但疫苗不能有效運輸至引流淋巴結和免疫耐受環境，大大降低了腫瘤疫苗的療效。納米技術的引入為改善和解決這些問題提供了契機。與傳統疫苗相比，納米材料不僅能提高抗原/佐劑的穩定性，而且通過優化其組成、粒徑、表面性質等，可以有效遞送抗原/佐劑至淋巴結，提高抗原提呈細胞特別是樹突狀細胞(DCs)對抗原的吞噬和遞呈，顯著增強了疫苗的免疫應答反應。

但是，目前納米疫苗的構建仍然存在很多亟待解決的問題：比如大量有機試劑的使用，嚴重影響了其生物相容性以及體內安全性；疫苗的靶向性較弱；疫苗的溶酶體逃逸效率低，誘導抗原特異性細胞毒T淋巴細胞(CTL)應答較弱等。已有的用于溶酶體逃逸材料中，最常用的材料是聚陽離子聚合物(例如聚乙烯亞胺(PEI))和細菌或病毒衍生的細胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)。由于PEI具有一定毒性，需要平衡逃逸效率和毒性之間的關系；相反，盡管CPPs顯著改善了細胞毒性，但溶酶體逃逸效率也相對較低。因此，提高納米疫苗的靶向性以及溶酶體逃逸效率是納米疫苗亟需解決的課題。

經檢索，有關利用生物相容性好的介孔二氧化硅納米顆粒，靜電吸附模式抗原卵清蛋白 (OVA)，通過表面涂覆金屬-多酚網絡(Metal-Phenolic Network,MPN)涂層防止OVA的泄露并增加納米顆粒的溶酶體逃逸功能；同時在表面修飾甘露糖，靶向免疫細胞表面的甘露糖受體，增強細胞對其攝取能力以提高疫苗遞送效率的基于金屬-多酚網絡結構的靶向納米疫苗及其制備方法還未見報道。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是提供一種基于金屬-多酚網絡結構的靶向納米疫苗制備及其產品。

本發明所述的基于金屬-多酚網絡結構的靶向納米疫苗的制備方法，步驟是：

(1)負載卵清蛋白OVA的介孔二氧化硅納米顆粒制備

稱取5mg氨基化的介孔二氧化硅納米顆粒溶于1mL去離子水中，然后加入1mL濃度為1.2mg/mL的FITC標記的卵清蛋白OVA，按如此比例將兩者混合，渦旋混勻，磁力攪拌 1-3h；將反應液8000r/min離心5-8min，獲得上清液，利用BCA法檢測上清液中卵清蛋白 OVA的含量，根據初始投入的OVA量計算介孔二氧化硅納米顆粒中OVA的吸附量，再水洗兩次，即得到負載OVA的介孔二氧化硅納米顆粒；

(2)甘露糖修飾單寧酸分子的合成