[發(fā)明專利]一種酶促化學(xué)發(fā)光D－二聚體檢測(cè)試劑盒的制備及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011334413.5
• 申請(qǐng)日: 2020-11-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112763720A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧興朝;陳歡;甘筱靜;林金昌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳容金科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 廣東良馬律師事務(wù)所 44395
• 代理人: 劉海杰

本發(fā)明涉及POCT化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，且公開(kāi)了一種酶促化學(xué)發(fā)光D－二聚體檢測(cè)試劑盒的制備方法，試劑盒包括試劑條、吸頭、廢物盒、試劑條架、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、樣品、樣品稀釋液、堿性磷酸酶標(biāo)記抗體和磁珠包被抗體；堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的制備方法包括以下步驟：Ⅰ、抗體的活化；Ⅱ、AP的活化；Ⅲ、AP交聯(lián)抗體；磁珠包被抗體的制備方法包括以下步驟：一、制備磁珠包被；二、磁珠交聯(lián)抗體；三、磁珠封閉；四、磁珠清洗和保存。采用本發(fā)明得到的試劑盒進(jìn)行D?Dimer檢測(cè)，可縮短檢測(cè)時(shí)間，提高產(chǎn)品性能，可以幫助更好的診斷血栓疾病，且檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單，便于操作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及POCT化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種酶促化學(xué)發(fā)光D－二聚體檢測(cè)試劑盒的制備及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

D二聚體增高提示了與體內(nèi)各種原因引起的血栓性疾病相關(guān)，同時(shí)也說(shuō)明了纖溶活性的增強(qiáng)，臨床上常見(jiàn)于彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)、深靜脈血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、急性心肌梗塞、腦梗塞、惡性腫瘤、卵巢癌、肺癌、敗血癥、肝病、妊高癥孕婦、先兆子痢、燒傷、外科手術(shù)、創(chuàng)傷和膿毒血癥等均可使D－二聚體升高，但是D－二聚體檢測(cè)的升高并不能說(shuō)明血栓形成的原因及位置，必須結(jié)合臨床和其他檢查綜合分DIC(休克、系統(tǒng)感染、外傷、先兆子痢、惡性疾病和燒傷等)的并發(fā)癥，血液在全身微小血管內(nèi)廣泛性凝固，形成以血小板和纖維蛋白為主要成分的微血栓。此過(guò)程消耗了大量的血小板和凝血因子，并通過(guò)激活途徑激活了纖溶系統(tǒng)。微血栓中交聯(lián)纖維蛋白被纖溶酶降解而產(chǎn)生大量高于正常百倍的D－二聚體。與其他診斷DIC的指標(biāo)相比較，D－二聚體是唯一直接反映凝血酶和纖溶酶生成的理想指標(biāo)；診斷DIC的特異性也早于其他指標(biāo)。

深靜脈血栓(DVT)的篩查血漿D－二聚體陰性可排除DVT的可能性。造影證實(shí)DVT者D－二聚體100％陽(yáng)性。可作溶栓治療和肝素抗凝的用藥指導(dǎo)及療效觀察；肺栓塞(PE)是一種較常見(jiàn)的潛在致命性疾病，尤其多見(jiàn)于血液病、心臟病和外科手術(shù)病人。PE臨床表現(xiàn)差異極大且缺乏特異性(從無(wú)任何表現(xiàn)到猝死)、常規(guī)檢查無(wú)法獲得直接證據(jù)，加上對(duì)該病的認(rèn)識(shí)不足，常造成漏診或誤診。及時(shí)治療依賴早期診斷。對(duì)于呼吸困難、胸悶、咳嗽、咯血，暈厥的患者，尤其是近期有外傷，手術(shù)及長(zhǎng)途旅行史；既往患有深靜脈血栓，應(yīng)考慮是否存在PE.D－二聚體測(cè)定是PE必備的篩查方法0.5mg/L可除外PE。

現(xiàn)有檢測(cè)D－二聚體的方法有發(fā)色底物法，免疫比濁法，手工ELISA法，但是這些方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，敏感度低，特異性差。

發(fā)明內(nèi)容

(一)解決的技術(shù)問(wèn)題

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種酶促化學(xué)發(fā)光D－二聚體檢測(cè)試劑盒的制備及檢測(cè)方法，采用本試劑盒進(jìn)行D-Dimer檢測(cè)，縮短檢測(cè)時(shí)間，提高產(chǎn)品性能，可以幫助更好的診斷血栓疾病。

(二)技術(shù)方案

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種酶促化學(xué)發(fā)光D－二聚體檢測(cè)試劑盒的制備方法，所述試劑盒包括試劑條、吸頭、廢物盒、試劑條架、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、樣品、樣品稀釋液、堿性磷酸酶標(biāo)記抗體和磁珠包被抗體；

所述堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的制備方法包括以下步驟：

Ⅰ、抗體的活化；

Ⅱ、AP的活化；

Ⅲ、AP交聯(lián)抗體；

所述磁珠包被抗體的制備方法包括以下步驟：

一、制備磁珠包被；

二、磁珠交聯(lián)抗體；

三、磁珠封閉；

四、磁珠清洗和保存

優(yōu)選的，所述抗體的活化包括以下步驟：